[发明专利]一种在肝癌细胞中高效高特异表达靶基因的载体系统

说明书

本发明公开了一种在肝癌细胞中高效高特异表达靶基因的载体系统，所述载体系统包括pGL3‑Basic Vector载体，突变型AFP启动子，该突变型AFP启动子连接到pGL3‑Basic Vector载体，构建载体系统GPS/AFP。本发明所述的载体只有在能分泌AFP蛋白的肝癌细胞中表达，而在正常等无分泌AFP蛋白的细胞中不表达，因此对肝癌的靶向治疗具有很高的特异性。该载体连接的为含有双突变的AFP启动子，与野生型AFP启动子相比，其表达效率为其500多倍，因此具有高效的特点。

技术领域

本发明属于基因工程领域，尤其是涉及一种在肝癌细胞中高效高特异表达靶基因的载体系统。

背景技术

如何让靶基因高效且高特异的在肝癌细胞中表达是肝癌基因靶向治疗的关键。甲胎蛋白（AFP）在成年人的正常肝细胞中不表达，但是在肝癌细胞（HCC）中AFP基因启动子可被激活，从而导致AFP转录和表达。因此，AFP启动子可被视为启动表达载体在肝癌细胞特异性表达的开关。然而，实际上带有AFP启动子的载体表达效率不高，如何在高特异性的基础上增强其表达效率是研究的关键。

发明内容

本发明的目的在于提供一种在肝癌细胞中高效高特异表达靶基因的载体系统，本发明从86个肝癌组织中发现并鉴定-55 G>A & -119 C>A双突变能使载体的表达效率显著提高，将该突变型AFP启动子连接到pGL3-Basic Vector载体，构建载体系统GPS/AFP（pGL3with Promoter SNP of AFP），并进一步在肝癌细胞Hep3B和Huh7中验证，该载体系统的表达效率明显升高。

本发明采用的技术方案为：

一种在肝癌细胞中高效高特异表达靶基因的载体系统，包括pGL3-Basic Vector载体，突变型AFP启动子，该突变型AFP启动子连接到pGL3-Basic Vector载体，构建载体系统GPS/AFP。

进一步的：所述突变型AFP启动子为-55 G>A & -119 C>A双突变启动子。

进一步的：所述突变型AFP启动子核苷酸序列-119 ~ -55为ACAAATGTCCCATTTTCAA CCTAAGGAAA TACCATAAAG TAACAGATAT ACCAACAAAA GGTTAA。

进一步的：所述突变型AFP启动子核苷酸序列-335 ~ -20为GCCTG GCATATGATAGGCATTTAAT AGTTTTAAAG AATTAATGTA TTTAGATGAA TTGCATACCA AATCTGCTGT CTTTTCTTTATGGCTTCATT AACTTAATTT GAGAGAAATT AATTATTCTG CAACTTAGGG ACAAGTCATG TCTTTGAATATTCTGTAGTT TGAGGAGAAT ATTTGTTATA TTTGCAAAAT AAAATAAGTT TGCAAGTTTT TTTTTTCTGCCCCAAAGAGC TCTGTGTCCT TGAACATAAA ATACAAATAA CCGCTATGCT GTTAATTATT GACAAATGTCCCATTTTCAA CCTAAGGAAA TACCATAAAG TAACAGATAT ACCAACAAAA GGTTAATAGT TAACAGGCATTGCCTGAAAA。

进一步的：所述突变型AFP启动子核苷酸序列为SEQ ID No.3所示。

进一步的：所述突变型AFP启动子的扩增引物为：AFP启动子上游引物为：5’-CCGACG CGT GCG GCC GCA AGC TTT AGA AAA TCC TGG TGC C-3’；下游引物为：5’-CCG CTCGAG TTA ATT AAT GTT ATT GGC AGT GGT GGA AG-3’。