[发明专利]一种长臀鮠精液超低温保存方法及其稀释液

权利要求书

1.一种长臀鮠精液的超低温保存方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.鱼种选择：选择无疾病、性成熟特征明显的雄性亲鱼；

S2.配制精液保存稀释液；

S3.采集精液：对步骤S1的雄性亲鱼进行精液采集；

S4.精液超低温保存：将步骤S2的精液保存稀释液中加入硫酸新霉素和链霉素后，按照精液：保存稀释液＝1：5～6的体积比，将S3采集的精液保存在稀释液中；然后采用-10.5℃/30s的降温速率，在到达-150℃后，放入液氮中进行超低温保存；

S5.解冻复苏：取出超低温保存的长臀鮠精液，加入解冻液，放入32℃～40℃的水浴中快速解冻复苏；所述解冻液为体积分数0.65％～0.7％的PBS缓冲液；

其中，步骤S2的精液保存稀释液配方为：每100mL蒸馏水中含有0.15～0.2g葡萄糖、1.5～1.6g NaCl、0.15～0.18g KCl、0.02～0.03g CaCl₂、0.04～0.05g MgSO₄·7H₂O、0.06～0.07g NaHCO₃、0.03～0.04g Na₂HPO₄·H₂O、0.01～0.015g KH₂PO₄、0.18～0.2g C₆H₁₂O₆·H₂O，终体积浓度为10％的二甲基亚砜；

或配方为：每100mL蒸馏水中含有1.5～2g葡萄糖、1～1.5g果糖、0.05～0.1g KCl、0.01～0.03g CaCl₂、0.18～0.25g NaHCO₃，终体积浓度为10％的二甲基亚砜；

或配方为：每100mL蒸馏水中含有2.5～3g葡萄糖、0.8～1g NaCl、0.1～0.2g KCl、0.02～0.04g CaCl₂、0.01～0.02g MgCl₂·6H₂O、0.05～0.08g Na₂HPO₄、0.3～0.4g NaHCO₃、0.1～0.2g酪氨酸、0.05～0.1g甘氨酸，终体积浓度为10％的二甲基亚砜。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述精液保存稀释液配方为：每100mL蒸馏水中含有0.18g葡萄糖、1.52g NaCl、0.168g KCl、0.028g CaCl₂、0.0472g MgSO₄·7H₂O、0.065g NaHCO₃、0.035g Na₂HPO₄·H₂O、0.012g KH₂PO₄、0.188g C₆H₁₂O₆·H₂O，终体积浓度为10％的二甲基亚砜；

或配方为：每100mL蒸馏水中含有1.8g葡萄糖、1.2g果糖、0.08g KCl、0.02g CaCl₂、0.21g NaHCO₃，终体积浓度为10％的二甲基亚砜；

或配方为：每100mL蒸馏水中含有2.68g葡萄糖、0.98g NaCl、0.16g KCl、0.03g CaCl₂、0.012g MgCl₂·6H₂O、0.06g Na₂HPO₄、0.32g NaHCO₃、0.12g酪氨酸、0.08g甘氨酸，终体积浓度为10％的二甲基亚砜。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S1所述鱼种选择具体是：先选育出外形无伤病、成熟期、体重不低于3斤的个体进行强化培育；然后选择体质强壮健康、体表无损伤、无充血、腹胀、烂鳍、突眼病症，且性成熟特征明显、体质健壮、形态端正、游姿平稳、体色鲜艳的雄性亲鱼采集精液。