[发明专利]一种长臀鮠精液超低温保存方法及其稀释液

说明书

本发明公开了一种长臀鮠精液的保存稀释液和超低温保存方法。所述保存稀释液由糖、钠盐、钾盐、钙盐、酪氨酸、甘氨酸、蒸馏水和抗冻剂二甲基亚砜组成。所述超低温保存方法包括如下步骤：选择符合条件的优良雄性亲鱼进行精液采集，保存于加了硫酸新霉素和链霉素的保存稀释液中，采用‑10.5℃/30s的降温速率，在到达‑150℃后，放入液氮中进行超低温保存；需要解冻复苏时，取出超低温保存的长臀鮠精液，加入体积分数0.65%～0.7%的PBS缓冲液作为解冻液，放入32℃～40℃的水浴中快速解冻复苏。本发明上述技术能够保证长臀鮠精液保存时间的持久性，而且对精液的保护效果好，保存后精子的成活率高、活力好。

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域。更具体地，涉及一种名贵易危鱼类长臀鮠的精液超低温保存方法及其稀释液。

背景技术

长臀鮠是鲇形目，长臀鮠科，长臀鮠属鱼类。体长，侧扁，背鳍起点为体最高处。头平扁，略呈三角形，背面骨粗糙裸露。吻突出，钝圆。口近端位，弧形，上颌略突出。为亚热带山麓河溪底层鱼类，喜清澈流水环境。长臀鮠无肌间刺，肉味鲜美，营养价值高，所以市面上价格较高，经常出现供不应求的状况。野生长臀鮠由于过度捕捞，导致其野生资源和苗种的匮乏（导致种苗等野生资源十分匮乏）。同时，长臀鮠是珠江流域最名贵、人工繁育难度最大的名优经济鱼类之一。纵然国内部分学者长期致力于长臀鮠的人工繁殖学，受精生物学的基础研究，力求找到影响长臀鮠人工受精苗种受精率存活率的关键因素，但效果甚微。

我们课题组在珠江长臀鮠初步人工繁殖成功的基础上，发现制约长臀鮠人工繁殖的主要因素不是水温、pH等传统环境生态因子，也不是雌性亲鱼卵质不好，问题可能出在雄亲鱼身上，与雄亲鱼的性腺发育状态有关，而发育较好的雄亲鱼很难获得，即使偶尔获得了发育较好的雄亲鱼，但雌亲鱼也可能没有发育成熟，这种雌雄发育不同步的现象是长臀鮠人工繁殖不能成功的瓶颈问题。因此，对长臀鮠雄性亲鱼精液的保存是至关重要的，目前尚未见有相关的研究和报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有长臀鮠精液保存技术的不足，提供一种长臀鮠精液稀释液和超低温保存方法，为其种质研究及遗传管理、精液冷冻保存及种质保护等提供保障，对解决长臀鮠人工繁殖技术难题、保护长臀鮠资源及实现我国名优鱼类养殖业的健康可持续发展提供重要的科学指导。

本发明的目的是提供一种长臀鮠精液保存稀释液。

本发明另一目的是提供一种长臀鮠精液超低温保存方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种长臀鮠精液保存稀释液，由糖、钠盐、钾盐、钙盐、酪氨酸、甘氨酸、蒸馏水和抗冻剂组成；所述抗冻剂为二甲基亚砜。

其中，优选地，所述糖为葡萄糖，或所述糖为葡萄糖和果糖。

优选地，所述钠盐为NaCl、NaHCO₃或Na₂HPO₄中的一种或几种。

优选地，所述钾盐为KCl，或所述钾盐为KCl和KH₂PO₄。

优选地，所述钙盐为CaCl₂。

优选地，所述长臀鮠精液保存稀释液还包含有镁盐；优选地，所述镁盐为MgCl₂或MgSO₄。

本发明的长臀鮠精液保存稀释液使用前加入硫酸新霉素和链霉素。优选地，硫酸新霉素和链霉素的加入体积比均为1～1.2：1。

具体优选地，本发明所述长臀鮠精液保存稀释液有以下A、B、C三种配方：