[发明专利]一种肿瘤干细胞靶向脂质纳米粒及制备方法与应用

说明书

本发明提供一种肿瘤干细胞靶向脂质纳米粒，由A15‑聚乙二醇‑十八醇嫁接物、单硬脂酸甘油酯、盐霉素组成，亲水的含端氨基端羧基的聚乙二醇通过酯化反应链接十八醇，十八醇的长脂肪链段可插入脂质纳米粒，其中A15为RNA适配体，与CD133分子亲和力强，可靶向CD133高表达的肝癌肿瘤干细胞。该脂质纳米粒作为载体包封肿瘤干细胞特异性药物盐霉素，通过A15的靶向作用，递送至肿瘤干细胞并发挥抗肿瘤药效，靶向并治疗CD133分子高表达的肝癌肿瘤干细胞。

技术领域

本发明属靶向脂质纳米粒及制备方法，主要涉及一种肿瘤干细胞靶向脂质纳米粒及其制备方法。

技术背景

固体脂质纳米粒(Solid lipid nanoparticle,SLN)是在20世纪90年代初发展起来的一种可替代乳剂、脂质体和聚合物纳米粒的新型胶体给药系统，属于亚微粒给药系统。SLN易制备并可用于静脉给药，也可用于口服或局部给药，适合多种给药途径。SLN作为药物载体可提高药物的生物利用度，可控制药物释放以及发挥良好的靶向性。

核酸适配体(Aptamer)是短的DNA或RNA片段，一般由12～30个碱基构成。适配体可形成特定结构的空间构型，与目标蛋白发生特异性结合。与抗体相比，适配体具备分子量小、低免疫原性、易获得等优点。A15为RNA适配体，可识别肿瘤干细胞标志物CD133分子，且有较强亲和力和特异性。A15由15个核糖核苷酸组成，文献报道，与单克隆抗体相比，该适配体在肿瘤细胞球里渗透能力强、保留时间长。

盐霉素是一种聚醚类离子型抗生素，对大多数革兰氏阳性菌和各种球虫有比较强的抑制和杀灭作用。其临床前及临床研究数据较少，少数文献报道其存在严重的肌肉和神经毒性，限制其主要应用于禽类疾病。2009年Gupta等人通过高通量筛选法，发现盐霉素具有杀伤乳腺癌干细胞的能力，降低乳腺癌干细胞比例的作用比常规化疗药紫杉醇高100倍。在其他肿瘤上，如慢性淋巴细胞白血病，也已被证明可特异性的杀伤肿瘤干细胞。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种肿瘤干细胞靶向的脂质纳米粒，该纳米粒由A15-聚乙二醇-十八醇嫁接物，单硬脂酸甘油酯，单硬脂酸聚乙二醇酯，盐霉素组成，其中A15-聚乙二醇-十八醇嫁接物的重量百分比为9.1～17.9wt％、单硬脂酸甘油酯的重量百分比为69.5～72.0wt％，单硬脂酸聚乙二醇酯的重量百分比为3.6～7.6wt％，盐霉素的重量百分比为3.6～7.6wt％。

本发明的第二个目的是提供所述肿瘤干细胞靶向脂质纳米粒的制备方法，具体通过以下步骤实现：

(1)分别取20mg单硬脂酸甘油酯、1.0～2.0mg单硬脂酸聚乙二醇酯及1.0～2.0mg端氨基聚乙二醇-十八醇嫁接物，1.0～2.0mg盐霉素置于2.0mL无水乙醇，水浴50℃加热溶解，为有机相，超纯水为分散相，磁力搅拌条件下，有机相注入分散相，继续搅拌5min，得含游离氨基的脂质纳米粒(NH₂-PEG-SLN/SAL)；

(2)取游离氨基脂质纳米粒(NH₂-PEG-SLN/SAL)分散液，焦碳酸二乙酯处理水稀释纳米粒浓度至100μg/mL。加入氨基摩尔1～2倍的N，N-二琥珀酰亚胺基碳酸酯(DSC)，室温搅拌(400rpm)反应9h。加入等摩尔数的氨基A15，继续搅拌反应过夜。反应结束后，将反应液置于分子量为30kDa的超滤离心管。离心，弃滤液，加入焦碳酸二乙酯处理水清洗两次，除去未反应的适配体。未滤过液体即为A15-PEG₃₄₀₀-SLN/SAL纳米分散液。