[发明专利]一种CIK细胞的诱导培养试剂及其培养方法

权利要求书

1.一种CIK细胞的诱导培养试剂，其特征在于，该试剂包括试剂A：50ng/ml抗CD3单克隆抗体；试剂B：1000IU/ml IFN-γ；试剂C：1000IU/ml IL-2和20ng/ml IL-15；试剂D：100IU/ml IL-1；试剂E：淋巴细胞分离液40ml。

2.一种利用上述试剂对CIK细胞的诱导培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)、取试剂A于T-175培养瓶包被，4℃过夜；

2)、取机采外周血30ml，用D-PBS稀释至50ml，试剂E利用密度梯度离心法收获PBMC，1500rpm30分钟；

3)、将收集的PBMC用D-PBS清洗2遍，1350rpm 5分钟，将清洗后的PBMC按照1-2*10^6/ml重悬于100ml X-VIVO15培养基中，加入试剂B，置于二氧化碳培养箱孵育；

4)、24小时后加入试剂C 100ul和试剂D；

5)、第3天加入150ml培养基和试剂C 150ul；

6)、第6天加入450ml培养基和试剂C 450ul，分别转移至2个培养袋中；

7)、第9天分别在两个培养袋加入450ml培养基和试剂C 450ul；

8)、第12天分别在两个培养袋加入400ml培养基和试剂C 400ul，取样做质检；

9)、第14天收集细胞，并取样做流式，即可。