[发明专利]一种能在常温下对氨基酸有效拆分的手性冠醚柱

说明书

技术领域

本发明属于色谱分离柱技术领域，具体是涉及一种能在常温下对氨基酸进行有效分离的R-(3,3'-氯基-1,1'-二萘基)-20-冠-6高效液相色谱手性冠醚柱。

背景技术

手性化合物的研究现在已成为立体化学研究中最主要、最活跃的领域，手性化合物的拆分是手性化合物研究的基础。近些年来，手性化合物的拆分取得了比较大的进展。特别是在色谱手性固定相方面，其中高效液相色谱具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广等优点，在生物化学与分子生物学、医药学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域得到广泛应用。目前专门用于氨基酸手性拆分的高效液相色谱存在着对混合氨基酸的手性拆分效果不好，对部分单个氨基酸进行手性拆分时温度条件较为苛刻等缺陷，不利于日常应用。因此，研发一种新的高效液相色谱手性分离柱，实现在常温条件下对氨基酸的有效拆分，就成为亟待解决的技术问题，但现有技术中尚未见有很好的解决办法。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种以R-(3,3'-氯基-1,1'-二萘基)-20-冠-6制备的高效液相色谱手性冠醚柱，实现在常温条件下对20种氨基酸进行有效的拆分。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。

一种能在常温下对氨基酸有效拆分的手性冠醚柱，先合成R‐(3,3'‐氯基‐1,1'‐二萘基)‐20‐冠‐6冠醚，并通过物理涂敷的方法将冠醚涂敷在C18表面，再进一步制备成高效液相色谱手性冠醚柱。

所述的能在常温下对氨基酸有效拆分的手性冠醚柱，具体由以下方法制备得到：

(1)R‐(3,3'‐氯基‐1,1'‐二萘基)‐20‐冠‐6的合成：

在N₂保护下，在圆底烧瓶中加入150ml丙酮，再加入8g R‐联萘酚，20g碳酸钾，加热到70℃，缓慢滴加5.1mL碘甲烷，回流12h后TCL检测，减压旋蒸除去溶剂，用蒸馏水和二氯甲烷萃取，用无水NaSO₄固体干燥、过滤后，减压除去溶剂，残留物经硅胶柱纯化过柱，洗脱剂为丙酮:石油醚＝1:40，得到白色晶体B；

在N₂保护下，将4g白色晶体B溶解到150mL乙醚溶液中，再加入32.1mL的正丁基锂和5.6mL的四甲基二乙胺，在25℃下搅拌8h，将反应物冷却到‐78℃，将8g六氯乙烷溶解在20mL正戊烷溶液中，在15min内加入到反应液中，搅拌1h后将反应物缓慢升温到25℃搅拌12h；加入160mL饱和Na₂SO₃溶液搅拌除去多余的液溴；混合物用二氯甲烷和蒸馏水萃取，有机相用无水Na₂SO₄干燥和蒸发，用硅胶柱纯化，洗脱剂为丙酮:石油醚＝1:20，得白色晶体C；

取4g白色晶体C溶解于150ml无水二氯甲烷中，在0℃下缓慢加入4ml的BBr₃，缓慢升至25℃，反应24h后降到0℃，加入蒸馏水除去多余BBr₃，用二氯甲烷和水萃取，无水MgSO₄干燥有机层硅胶柱色谱纯化，洗脱剂为丙酮:石油醚＝1:10，得到白色化合物D；

在氮气保护下，将2g白色化合物D溶解到200ml无水四氢呋喃THF中，加入2.5g五甘醇对甲苯磺酸酯和0.24g KOH，在60℃磁力均匀搅拌下回流72h，TCL检测，用二氯甲烷和蒸馏水多次萃取，用无水MgSO₄干燥有机层并用硅胶柱纯化，洗脱剂为丙酮:石油醚＝1:1，得到淡黄色粘稠液体，即为所需的R‐(3,3'‐氯基‐1,1'‐二萘基)‐20‐冠‐6冠醚。

(2)手性冠醚的涂敷：

取0.3g冠醚溶解于15mL的二氯甲烷中，得冠醚溶液；称取2g 5μm的C18硅胶装在25mL圆底烧瓶中，用物理涂敷方法将所得冠醚溶液涂敷在C18硅胶上，旋转蒸发除去有机溶剂DMC，得到R‐(3,3'‐氯基‐1,1'‐二萘基)‐20‐冠‐6手性冠醚固定相；

(3)手性色谱柱的填装：

取所得R‐(3,3'‐氯基‐1,1'‐二萘基)‐20‐冠‐6手性冠醚固定相1.5g和25mL甲醇水溶液搅拌形成悬浮液，甲醇与水的体积比＝1：10；过筛板250目待用，蒸馏水作流动相顶替液，在40MPa压力下装填，即得到所需的手性冠醚柱。