[发明专利]一种测定自由巯基含量的方法

权利要求书

1.一种测定供试品中自由巯基的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)将供试品溶液进样至高效液相色谱仪中进行色谱分离，经过衍生仪时在衍生试剂的作用下进行衍生，由紫外检测器采集液相色谱数据；

(2)利用已知自由巯基浓度的对照品溶液经过与步骤(1)所述供试品溶液相同的处理，得到对照品溶液的液相色谱数据；

(3)通过供试品溶液的液相色谱峰面积与对照品溶液的液相色谱峰面积的比较，计算得到供试品中自由巯基的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述供试品为含有自由巯基的物质的样品。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述含有自由巯基的物质为二巯基聚乙二醇、二硫苏糖醇、半胱氨酸或2-巯基乙醇中的任意一种或至少两种的混合物。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述色谱分离时的流动相为醇类、乙腈或水中的任意一种或至少两种的混合物；

优选地，步骤(1)所述色谱分离时的流动相为5％～95％乙腈，优选60-80％乙腈。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述色谱分离时使用的色谱柱为含有长链烷基键合相的色谱柱或其相关色谱柱，优选C18柱；柱温为4～50℃。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述色谱分离时样品流速为0.1～5mL/min。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述衍生剂为5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)的磷酸钠-EDTA缓冲液；

优选地，所述衍生剂中5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)的浓度为0.01～100mg/100mL，优选0.05～20mg/100mL；

优选地，所述衍生剂中磷酸钠的浓度为0.01～1mol/L，优选0.05～0.5mol/L；

优选地，所述衍生剂中磷酸钠缓冲液的pH值为6～12，优选7～10。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述衍生仪的衍生管的长度为0.2～50m；

优选地，所述衍生仪的衍生温度为20～100℃。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，所述衍生仪中衍生试剂的流速为0.1～5mL/min。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，所述紫外检测器采集液相色谱数据为采集检测波长为380～450nm的数据。