[发明专利]同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的胶体金试纸条及其制备方法

权利要求书

1.同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的胶体金试纸条，由底板、硝酸纤维素膜、样品垫、金标垫和吸收垫组成，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上的质控线包被抗鼠IgG，检测线包被抗1型鸭甲型肝炎病毒多抗；所述金标垫包被胶体金标记的同时识别1型和3型鸭甲型肝炎病毒的单克隆抗体。

2.如权利要求1所述的同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的胶体金试纸条，其特征在于，所述抗鼠IgG为羊抗鼠IgG，所述抗1型鸭甲型肝炎病毒多抗为兔抗1型鸭甲型肝炎病毒多抗。

3.如权利要求1所述的同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的胶体金试纸条，其特征在于，所述同时识别1型和3型鸭甲型肝炎病毒的单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO：C201701的杂交瘤细胞株DHAV-MAb1分泌。

4.权利要求1所述的同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.硝酸纤维素膜的包被与封闭：将抗鼠IgG和抗1型鸭甲型肝炎病毒多抗分别包被于硝酸纤维素膜上形成质控线和检测线，干燥，再将硝酸纤维素膜用牛血清白蛋白封闭，干燥，制得包含检测线和质控线并经封闭处理的硝酸纤维素膜；

B.金标垫的包被：将胶体金标记的同时识别1型和3型鸭甲型肝炎病毒的单克隆抗体溶液加于玻璃纤维素膜或聚酯纤维素膜上，干燥，制得金标垫；

C.试纸条的组装：将包含检测线和质控线并经封闭处理的硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫和吸收垫依次粘在底板上，制得胶体金试纸条。

5.如权利要求4所述的同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤A是将羊抗鼠IgG用0.01mol/L、pH7.4的PBS稀释至浓度不低于0.6mg/mL后包被于硝酸纤维素膜上形成质控线，将兔抗1型鸭甲型肝炎病毒多抗用0.01mol/L、pH7.4的PBS稀释至浓度不低于0.8mg/mL后包被于硝酸纤维素膜上形成检测线，干燥，再将硝酸纤维素膜用0.01g/mL牛血清白蛋白溶液于37℃封闭不低于1小时，干燥，制得包含检测线和质控线并经封闭处理的硝酸纤维素膜。

6.如权利要求5所述的同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤A是将羊抗鼠IgG用0.01mol/L、pH7.4的PBS稀释至浓度为1.0mg/mL后包被于硝酸纤维素膜上形成质控线，将兔抗1型鸭甲型肝炎病毒多抗用0.01mol/L、pH7.4的PBS稀释至浓度为1.0mg/mL后包被于硝酸纤维素膜上形成检测线，干燥，再将硝酸纤维素膜用0.01g/mL牛血清白蛋白溶液于37℃封闭1小时，干燥，制得包含检测线和质控线并经封闭处理的硝酸纤维素膜。

7.如权利要求4所述的同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤B中胶体金标记的同时识别1型和3型鸭甲型肝炎病毒的单克隆抗体溶液采用以下方法制得：按照1mL胶体金溶液加入0.1mol/L K₂CO₃溶液12-20μL与单克隆抗体28-34μg的比例将三者混匀，静置，再加入终浓度为0.01g/mL的牛血清白蛋白，混匀，静置，得到金标单克隆抗体溶液；取金标单克隆抗体溶液，4℃、2000r/min离心，收集上清液，再4℃、9000r/min离心，弃去上清液，沉淀用金标抗体重悬液稀释至原体积，4℃、9000r/min离心，弃去上清液，沉淀重复上述操作1-2次，最后按照1mL金标单克隆抗体溶液用不超过450μL金标抗体重悬液稀释的比例加入金标抗体重悬液进行稀释，即制得胶体金标记的同时识别1型和3型鸭甲型肝炎病毒的单克隆抗体溶液。