[发明专利]同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的胶体金试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种胶体金免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

鸭甲型肝炎病毒(DHAV)可引起雏鸭发生急性、高度致死性传染病，主要感染4周龄以下的雏鸭，其中1周龄以内的雏鸭死亡率高达95％，主要特征病变为患病鸭的肝脏肿大和出血。根据基因组特征和抗原中和试验，将鸭甲型肝炎病毒分为3个基因型或血清型，即鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)、2型(DHAV-2)和3型(DHAV-3)。其中鸭甲型肝炎病毒1型与2型不产生交叉保护作用，与3型有部分交叉中和反应。

目前，检测鸭甲型肝炎病毒抗原的方法有很多种，如病毒中和试验、ELISA、RT-PCR、免疫电镜等，这些方法各自都具有不可替代的优势，但也有自身不足的地方，如操作麻烦、试验所需时间长、不能用于快速诊断、灵敏度和特异性差等缺点，在生产实际应用中有很大的限制。而胶体金试纸条作为新的检测技术，具有操作简单、快速、特异性强、灵敏度高、不需要任何仪器和设备、肉眼即可判断结果等优点，有着广泛的应用价值。目前我国养鸭生产中均有1型和3型鸭甲型肝炎的发生和流行，但寻找1型和3型鸭甲型肝炎病毒的共同抗体并建立能同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的简便快速检测方法一直是学术界和生产中没有很好解决的难题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于研制一种能够同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的胶体金试纸条，从而为临床和基层单位不漏检1型或3型鸭甲型肝炎病毒提供广谱、灵敏、特异、简便、快速的检测技术。

为实现上述发明目的，经研究，本发明提供如下技术方案：

1.同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的胶体金试纸条，由底板、硝酸纤维素膜、样品垫、金标垫和吸收垫组成，所述硝酸纤维素膜上的质控线包被抗鼠IgG，检测线包被抗1型鸭甲型肝炎病毒多抗；所述金标垫包被胶体金标记的同时识别1型和3型鸭甲型肝炎病毒的单克隆抗体。

优选的，所述抗鼠IgG为羊抗鼠IgG，所述抗1型鸭甲型肝炎病毒多抗为兔抗1型鸭甲型肝炎病毒多抗。

优选的，所述同时识别1型和3型鸭甲型肝炎病毒的单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO：C201701的杂交瘤细胞株DHAV-MAb1分泌。

2.同时检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒的胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：

A.硝酸纤维素膜的包被与封闭：将抗鼠IgG和抗1型鸭甲型肝炎病毒多抗分别包被于硝酸纤维素膜上形成质控线和检测线，干燥，再将硝酸纤维素膜用牛血清白蛋白封闭，干燥，制得包含检测线和质控线并经封闭处理的硝酸纤维素膜；

B.金标垫的包被：将胶体金标记的同时识别1型和3型鸭甲型肝炎病毒的单克隆抗体溶液加于玻璃纤维素膜或聚酯纤维素膜上，干燥，制得金标垫；

C.试纸条的组装：将包含检测线和质控线并经封闭处理的硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫和吸收垫依次粘在底板上，制得胶体金试纸条。

优选的，所述步骤A是将羊抗鼠IgG用0.01mol/L、pH7.4的PBS稀释至浓度不低于0.6 mg/mL后包被于硝酸纤维素膜上形成质控线，将兔抗1型鸭甲型肝炎病毒多抗用0.01mol/L、 pH7.4的PBS稀释至浓度不低于0.8mg/mL后包被于硝酸纤维素膜上形成检测线，干燥，再将硝酸纤维素膜用0.01g/mL牛血清白蛋白溶液于37℃封闭不低于1小时，干燥，制得包含检测线和质控线并经封闭处理的硝酸纤维素膜。

更优选的，所述步骤A是将羊抗鼠IgG用0.01mol/L、pH7.4的PBS稀释至浓度为1.0 mg/mL后包被于硝酸纤维素膜上形成质控线，将兔抗1型鸭甲型肝炎病毒多抗用0.01mol/L、pH7.4的PBS稀释至浓度为1.0mg/mL后包被于硝酸纤维素膜上形成检测线，干燥，再将硝酸纤维素膜用0.01g/mL牛血清白蛋白溶液于37℃封闭1小时，干燥，制得包含检测线和质控线并经封闭处理的硝酸纤维素膜。