[发明专利]多重PCR引物、试剂盒及用途

说明书

相关申请

本申请是申请日为2015年11月4日，名称为“一种基于下一代测序技术检测β-地中海贫血突变的多重PCR引物和方法及应用”的中国专利申请201510740909.5的分案。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及引物，特别涉及多重PCR引物、试剂盒及用途。

背景技术

β-地中海贫血是一种由于β-珠蛋白基因(HBB)突变导致肽链表达失衡而产生的单基因遗传血液病，多由β-珠蛋白基因点突变所致。β-地中海贫血是世界上最常见的遗传性之一，据统计全世界约有1亿多人携带β-地中海贫血基因。β-地中海贫血也是我国南方各省最常见、危害最大的遗传病之一，我国部分省份的β-地中海贫血携带率见表1。地中海贫血基因主要为点突变，在中国南方人群中β-地中海贫血基因覆盖了46种点突变。

表1中国南方β地贫的人群携带率

地区β地贫携带率(％)广州2.54广西6.78四川2.18贵州4.72台湾1.10香港3.41

β-地中海贫血的基因诊断方法主要有：Sanger测序法、限制性片段长度多态性(RFLP)、反向点杂交(RDB)、等位基因特异性PCR(ARMS-PCR)。Sanger测序方法操作较繁琐，极大地限制了其在临床诊断中的应用，测序的检测通量也有限，并且对检测结果需要人工分析，分析耗时耗力。RFLP是通过识别特异性序列位点进行酶切反应，方法简便成本低廉，但其局限性是只能对有限的可产生酶切位点的突变进行检测，由于不完全或部分酶切反应还会导致假阳性或假阴性结果。反向点杂交技术的结果是用肉眼判读，失误率高，往往造成一份样本反复检测。ARMS-PCR需针对每个突变设计相应引物，每一对引物扩增条件都需优化，若需同时检测多种突变时则操作繁琐，而且也会出现假阳性或假阴性结果。

基于地中海贫血缺陷基因的市场和社会检测需求，以及目前地中海贫血缺陷基因检测现状的落后，利用高通量测序技术开发地中海贫血基因突变位点检测试剂盒势在必行。

发明内容

鉴于此，本发明提供了一种基于下一代测序技术检测β-地中海贫血突变的多重PCR引物和方法及应用。

第一方面，本发明提供了一种多重PCR引物。根据本发明的实施例，所述多重PCR引物由三对引物对组成：所述三对引物为与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示引物对、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示引物对以及SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示引物对分别对应的引物序列，所述三对引物对中的至少一条引物序列比SEQ ID NO:1-6中的相应序列的3’端多或者少0～3个核苷酸。

该多重PCR引物由三对引物组成，即六条序列组成，该六条序列与SEQ ID NO：1-6一一对应，所称的“对应”表现在：该六条序列中的一条、两条、三条、四条、五条或者全部六条与SEQ ID NO:1-6中的相应序列，在3’端多或者少0～3个核苷酸。所称序列的3'端和5'端是相对的，在本文中，3'端和5'端照本领域常规定义或者本领域技术人员常规理解。