[发明专利]一种用于LC-MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法

权利要求书

1.一种用于LC-MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）黄曲霉菌菌株培养：黄曲霉菌在固体培养基培养后，用无菌水将孢子从培养基上洗下，然后接种至液体培养基中扩培后得到黄曲霉菌样品；

（2）黄曲霉菌淬灭：将步骤（1）所得黄曲霉菌样品加入到冷甘油缓冲溶液淬灭剂中，快速混合涡旋、均质，然后置于低温条件下冷却，再通过真空抽滤快速过滤混合液，收集固体样品，冷冻干燥；

（3）黄曲霉菌细胞被膜破碎及代谢组提取：将步骤（2）冷冻干燥所得黄曲霉菌细胞样品破碎，利用代谢组提取液进行提取处理，再经离心、膜过滤后得到代谢组提取溶液；所述代谢组提取液是由甲醇、二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯和甲酸按体积比20~30：20~30：20~30：20~30：1~2混合形成；

（4）黄曲霉菌代谢组分析：步骤（3）所得代谢组提取溶液进入HPLC-MS系统进行分析检测，然后依据所得谱图进行黄曲霉菌代谢组分析。

2.根据权利要求1所述的用于LC-MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法，其特征在于，步骤（2）所述冷甘油缓冲溶液淬灭剂是由丙三醇和NaCl溶液以1：1~2：1的体积比混合而成，所述冷甘油缓冲溶液淬灭剂预冷到-30℃以下使用，所述NaCl溶液的浓度为13.5 g/L。

3.根据权利要求1所述的用于LC-MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法，其特征在于，步骤（2）所述黄曲霉菌样品和冷甘油缓冲溶液淬灭剂的体积比为1:4~1:6。

4.根据权利要求1所述的用于LC-MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法，其特征在于，步骤（2）所述低温条件下冷却为：混合液置于-20～-40℃条件下冷却3～5min。

5.根据权利要求1所述的用于LC-MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法，其特征在于，步骤（2）所述冷冻干燥的时间为8~12小时。

6.根据权利要求1所述的用于LC-MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法，其特征在于，步骤（3）中，以100~200mg黄曲霉菌细胞样品为基准，所述代谢组提取液的加入量为1~2mL。

7.根据权利要求1所述的用于LC-MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法，其特征在于，步骤（3）所述细胞被膜破碎及代谢组提取为超声破碎提取，超声的功率为240W～300W，超声破碎提取的时间为15~20min。

8.根据权利要求1所述的用于LC-MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法，其特征在于，步骤（3）所述离心的转速为8000~10000rpm，离心时间为5~10min；所述膜过滤的滤膜为0.22µm有机系滤膜。

9.根据权利要求1所述的用于LC-MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法，其特征在于，步骤（4）所述HPLC-MS系统分析检测的质谱条件为：离子源加热温度250~350℃，喷雾电压：正离子模式下为3.5~4Kv，负离子模式下为3.0~3.5Kv，鞘气为30~40Arb，辅气为5~10Arb，离子传输毛细管温度为300~320℃。