[发明专利]一种用于检测大鼠鼠源性成分的方法

说明书

本发明涉及一种用于检测大鼠鼠源性成分的方法，步骤如下：(1)取待检测样品，提取DNA；(2)以步骤(1)提取的DNA为模板，进行实时荧光定量PCR扩增；(3)当测得的Cp平均值为小于35时，曲线有明显指数增长期，呈现阳性，则待检测样品中含有大鼠鼠源性成分。本发明所述方法采用具有良好的特异性和重复性的引物和探针，利用所述的引物和探针进行的实时荧光定量PCR法检测大鼠鼠源性成分，操作简便、耗时少、特异性高，实验结果清晰可见、易于判定，为快速检测大鼠鼠源性成分提供了新的途径。

技术领域

本发明涉及一种用于检测大鼠鼠源性成分的方法，特别涉及利用实时荧光定量PCR(聚合酶链式反应)法检测大鼠鼠源性成分的方法，属于动物源性成分检测技术领域。

背景技术

随着人民群众生活水平的日益提高，牛羊肉的消费量逐年增加。因牛羊肉价格高、加工企业小散乱多难以监管，挂羊头卖狗肉的现象屡禁不止，老鼠肉冒充价格昂贵的牛羊肉的事件偶有发生，老鼠肉直接冒充牛羊肉或掺杂在牛羊肉制品中流入老百姓的餐桌，造成了及其恶劣的社会影响，其对食用者造成巨大的人身伤害。老鼠由于自身携带多种病菌，是多种传染病病原的储存宿主和主要传染源，同时，老鼠肉所含的铅和砷等有毒有害物质的含量也远高于其他肉类，直接食用会给人们带来极大的身体危害和疫病传染风险，轻则中毒，重则死亡。但目前，尚没有大鼠鼠源性成分检测的国家标准或者行业标准，普通消费者乃至食药质监部门通过肉眼难以鉴别，而传统检测方法繁琐、耗时长也导致其检测存在极大难度。

荧光定量PCR(聚合酶链式反应)是PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时，探针结合在DNA任意一条单链上；PCR扩增时，Taq酶的5'端-3'端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。该技术目前已广泛应用于物种鉴别领域。

中国专利文献CN105648046A(申请号201410644049.0)公开了利用动物种属间特异性较强的线粒体DNA序列设计5种动物(绵羊、山羊、水貂、海狸鼠和鸭)种属特异性引物，通过PCR反应得到长度各不相同的特异性扩增片段，对扩增产物电泳检测，能够一次性、准确、稳定、简单快捷的鉴别绵羊肉、山羊肉、水貂肉、海狸鼠肉和鸭肉，以及混合或加工过的肉制品中的这五种肉的成分。该技术虽然可以区分上述五种动物，但由于引物的特异性，其无法区分大鼠鼠源性成分，特别是与大鼠遗传关系较近的诸如小鼠等来源的成分。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种用于检测大鼠鼠源性成分的方法，为大鼠鼠源性成分的检测提供技术支持，为标准检测方法的建立提供实验支撑，为打击肉类掺假行政执法提供有力的科学依据。

本发明技术方案如下：

一种用于检测大鼠鼠源性成分的方法，步骤如下：

(1)取待检测样品，提取DNA；

(2)以步骤(1)提取的DNA为模板，进行实时荧光定量PCR扩增；所述实时荧光定量PCR的特异性引物组由一对特异性引物和特异性探针组成，上游特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

(3)当测得的Cp平均值为小于35时，曲线有明显指数增长期，呈现阳性，则待检测样品中含有大鼠鼠源性成分。

根据本发明优选的，所述步骤(1)中，DNA的浓度为360ng/μL，纯度为1.90。

根据本发明优选的，所述步骤(1)中，提取DNA为利用深加工食品DNA提取试剂盒进行提取。深加工食品DNA提取试剂盒为本领域常规市售产品，如天根生化科技有限公司等均有销售。