[发明专利]一种多重PCR检测微生态活菌制剂中食源性致病菌的方法

权利要求书

1.一种多重PCR检测微生态活菌制剂中食源性致病菌的方法，其特征在于，所述方法为：根据设计的特异性引物能用多重PCR快速高效的检测乙型副伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌七种。

2.根据权利要求1所述的一种多重PCR检测微生态活菌制剂中食源性致病菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤:

1)微生态活菌制剂的再水化：准确称取微生态活菌制剂0.05g，于EP管中，加入0.95mL灭菌PBS缓冲液，37℃摇床100rpm缓慢摇晃30min；

2)基因组提取：使用基因组提取试剂盒进行提取；

3)引物合成：根据本发明所设计的各种常见致病菌的引物，进行引物合成；

4)用多重PCR致病菌检测：将处理后的微生态制剂为模板，同时加入乙型副伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的特异性引物为引物进行多重PCR扩增，七重PCR的反应条件、反应体系如上述表4，表5所示；

5)核酸电泳检测：上述PCR产物加于2％琼脂糖凝胶电泳，观察是否存在致病菌条带。

3.根据权利要求2所述的一种多重PCR检测微生态活菌制剂中食源性致病菌的方法，其特征在于：

微生态活菌制剂的各种形式，包括固体颗粒、菌粉、液态等形式，其中液体形式为按比例进行稀释，同时适用于其他多种食品形式的应用。

4.根据权利要求2所述的一种多重PCR检测微生态活菌制剂中食源性致病菌的方法，其特征在于：本发明所设计的各种引物的核苷酸序列等具体信息。

5.根据权利要求2所述的一种多重PCR检测微生态活菌制剂中食源性致病菌的方法，其特征在于：本发明中乙型副伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的七重PCR的反应条件、反应体系，包括变性、退火、延伸的温度及时间，反应体系中添加的各种成分及其比例。