[发明专利]一种改进的细菌活菌计数方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种活菌计数法，尤其涉及一种改进的细菌活菌计数方法。

背景技术

目前常用的活菌计数法是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计，即取一定容量菌悬液，作一系列10倍倍比稀释，然后选择合适浓度的稀释液吸取定量稀释液，置于琼脂平板中培养，根据各浓度梯度稀释液在琼脂平板中生长繁殖出的细菌菌落的数量，推算出原菌悬液或培养物中的活菌数。

该法在实际操作过程中存在以下缺点：

1.试管长度较长﹑体积较大，占用灭菌锅的空间也大。试管具有圆形的底部，因此在超净台操作时必须使用试管架，占用了超净台的内部空间，如果试管较多而试管架又较少时，则就必须将试管倾斜放置，操作比较麻烦。

2.一个平皿只能对样品一个稀释浓度进行一次测样，如果某个样品具有3种不同的稀释浓度，每个稀释浓度需要进行3个重复样检测，则必须使用9块平皿。

3.活菌稀释液取样量为0.1ml-0.2ml，0.1ml-0.2ml菌悬液的含菌量在30-300之间才有计数的意义，也就是说每个重复样平皿上要有30-300个单菌落，计数速度比较慢。

4.菌悬液取样量为0.1ml-0.2ml，0.1ml-0.2ml菌悬液含菌量在30-300之间，在操作过程中细菌难以完全分散，分布不均匀、较易出现连片或连线的情况，给计数带来不便。

发明内容

本发明针对以不足，提供一种操作简单、方便快捷、提高计数效率的改进的细菌活菌计数方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种改进的细菌活菌计数方法，其特征在于，包括操作步骤：使用抗生素药瓶对活菌发酵液或者培养物进行浓度梯度稀释，振荡均匀后，用安装上7号金属针头的注射器垂直滴在相应的琼脂细菌计数平板上，静置后置于恒温培养箱中培养后取出直接计数即可。

根据所述的一种改进的细菌活菌计数方法，其特征在于，包括分装抗生素药瓶无菌液体的操作步骤，抗生素药瓶和瓶盖要配套使用，方法是：先将清洗洁净且干燥后的抗生素药瓶和瓶盖经121℃-126℃×30min-60min的灭菌处理，然后40℃-120℃烘干至完全干燥后冷却至室温，再用微量移样器或无菌吸管依次向抗生素药瓶中加入经过121℃-126℃×30min-60min的灭菌处理后冷却至室温的9Bml无菌生理盐水，无菌操作取出瓶盖盖上，放置在超净工作台中备用；再向抗生素药瓶中加入Bml待稀释菌液，使用漩涡振荡器对加有Bml待稀释菌液、总装量为10Bml的抗生素药瓶进行振荡稀释，振荡时间为15s-90s；使用安装上7号金属针头的注射器将振荡后的稀释菌液垂直滴在相应的细菌计数平板上，每个平板中滴入1-100滴，操作完成后平板静置的时间为5min-360min。

根据所述的一种改进的细菌活菌计数方法，其特征在于，包括操作步骤：清洗抗生素药瓶和瓶盖，晾干或烘干后分别装入无菌布袋扎好口后备用；清洗培养皿晾干或烘干后以5-11个为一组用报纸包好备用；将7号金属针头装入培养皿中和注射器、镊子、Bml微量移液器、5Bml微量移液器一起用报纸包好备用；用三角烧瓶分别装入固体琼脂培养基与食盐浓度为0.85%的生理盐水，用报纸扎好瓶口后备用；将以上材料依次放入高压灭菌锅中，盖上盖后开启电源升温，设定灭菌条件为121℃-126℃恒温30min-90min；取出自然降温至室温，将其它灭菌后的材料置烘箱中高温恒温置干燥无水分，然后取出放置于无菌室中自然降至室温。

根据所述的一种改进的细菌活菌计数方法，其特征在于，包括操作步骤：配制新洁尔灭消毒液对环境和空间消毒后，开启紫外灯管进行紫外线消毒。

根据所述的一种改进的细菌活菌计数方法，其特征在于，包括细菌计数操作步骤：其中，

（1）倒平板

将固体琼脂培养基重新加热融化后降温至45-100℃倒平板；

（2）分装9Bml无菌生理盐水于抗生素瓶中并塞好瓶塞

点燃超净工作台中的酒精灯，用无菌镊子夹取浸泡在75%酒精中的棉花团擦拭双手及超净工作台台面，取出5Bml的微量移液器，将移液量设定为4.5Bml，将抗生素瓶取出排放在超净工作台台面，用微量移液器依次吸取两次共9Bml无菌生理盐水于抗生素瓶中，然后用无菌镊子夹取瓶塞轻轻盖上抗生素瓶；

点燃超净工作台中的酒精灯，用无菌镊子夹取浸泡在75%酒精中的棉花团擦拭双手及超净工作台台面，取出无菌吸管，将抗生素瓶取出排放在超净工作台台面，用吸管吸取9Bml无菌生理盐水于抗生素瓶中，然后用无菌镊子夹取瓶塞轻轻盖上抗生素瓶；

（3）样品准备