[发明专利]一种奈米非肽液相制备方法

权利要求书

1.一种奈米非肽液相制备方法,其包括如下步骤,

1)以Dpm-NH₂和Fmoc-Trp(Boc)-OH在缩合剂的作用下合成Fmoc-Trp(B oc)-NH-Dpm，脱除Fmoc保护基，获得中间体1H-Trp(Boc)-NH-Dpm；

2)以中间体1H-Trp(Boc)-NH-Dpm和Fmoc-Gly-OH在缩合剂的作用下合成Fmoc-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm，脱除Fmoc保护基，获得中间体2H-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm；

3)以中间体2和Fmoc-Arg(Pbf)-OH在缩合剂的作用下合成Fmoc-Arg(Pb f)-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm，脱除Fmoc保护基，获得中间体3H-Arg(Pbf)-Gly-T rp(Boc)-NH-Dpm；

4)以中间体3和Fmoc-4-hydropro(OtBu)-OH在缩合剂的作用下合成Fmo c-4-hydropro(OtBu)-Arg(Pbf)-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm，脱除Fmoc保护基，获得中间体4H-4-hydropro(OtBu)-Arg(Pbf)-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm；

5)以中间体4和Fmoc-4-Fphe-OH在缩合剂的作用下合成Fmoc-4-Fphe-4-hydropro(OtBu)-Arg(Pbf)-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm，脱除Fmoc保护基，获得中间体5H-4-Fphe-4-hydropro(OtBu)-Arg(Pbf)-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm；

6)脱除OtBu、Pbf和Boc保护基。

2.根据权利要求1所述的奈米非肽液相制备方法，其中所述的缩合剂选自HOBt、EDC.HCl、HATU、DCC、DIC、HBTU、HOAt、HOBt、PyBOP、BT C中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的奈米非肽液相制备方法，其中所述的缩合剂选自HOBt和EDC.HCl的组合。

4.根据权利要求1所述的奈米非肽液相制备方法，脱除Fmoc保护基的试剂为DBU与二乙胺的混合液。

5.根据权利要求1所述的奈米非肽液相制备方法，步骤6)中，脱保护基试剂为TFA、H₂O、EDT、PhOMe、苯甲硫醚的混合物。

6.根据权利要求5所述的奈米非肽液相制备方法，脱保护基试剂为TFA：H₂O：EDT：PhOMe＝90-95：1-5：1-5：3-8

7.根据权利要求6所述的奈米非肽液相制备方法，脱保护基试剂为TFA：H₂O：EDT：PhOMe＝92：2：2：4。

8.根据权利要求1所述的奈米非肽液相制备方法，其还包括纯化步骤，所述纯化步骤为：7)反相色谱进行纯化。

9.根据权利要求8所述的奈米非肽液相制备方法，所述反相高压液相色谱法为以反相十八烷基硅烷为固定相，以0.1％醋酸水溶液/乙腈为流动相，收集目的峰馏分，浓缩冻干。

10.根据权利要求1所述的奈米非肽液相制备方法，步骤1)-5)中的溶剂独立地选自二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯中的一种或多种。

11.根据权利要求10所述的奈米非肽液相制备方法，步骤1)-5)中的溶剂为三氯甲烷。

12.根据权利要求1所述的奈米非肽液相制备方法，步骤1)-5)中，脱除Fmoc保护基前以甲醇进行析晶、过滤和清洗，脱除Fmoc保护基后以乙腈进行析晶、过滤和清洗。

13.根据权利要求1所述的奈米非肽液相制备方法，步骤6)中，脱除保护基后，以甲醇进行析晶、离心和清洗。

14.根据权利要求1所述的奈米非肽液相制备方法，

1)将Dpm-NH₂和Fmoc-Trp(Boc)-OH以CHCl₃溶解，加入HOBt、EDC.HCl，反应至完全，去除溶剂，加入甲醇，析出固体、过滤，固体以甲醇清洗后溶解于氯仿，依次加入DBU、二乙胺，反应至完全，去除溶剂，剩余物中加入乙腈，析出固体、过滤、以乙腈清洗并干燥，得中间体1H-Trp(Boc)-NH-Dpm；

2)将中间体1H-Trp(Boc)-NH-Dpm和Fmoc-Gly-OH以CHCl₃溶解，加入HOBt、EDC.HCl，反应至完全，去除溶剂，加入甲醇，析出固体、过滤，固体以甲醇清洗后溶解于氯仿，依次加入DBU、二乙胺，反应至完全，去除溶剂，剩余物中加入乙腈，析出固体、过滤、以乙腈清洗并干燥，得中间体2H-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm；

3)将中间体2H-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm和Fmoc-Arg(Pbf)-OH以CHCl₃溶解，加入HOBt、EDC.HCl，反应至完全，去除溶剂，加入甲醇，析出固体、过滤，固体以甲醇清洗后溶解于氯仿，依次加入DBU、二乙胺，反应至完全，去除溶剂，剩余物中加入乙腈，析出固体、过滤、以乙腈清洗并干燥，得中间体3H-Arg(Pbf)-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm；

4)将中间体3H-Arg(Pbf)-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm和Fmoc-4-hydropro(Ot Bu)-OH以CHCl₃溶解，加入HOBt、EDC.HCl，反应至完全，去除溶剂，加入甲醇，析出固体、过滤，固体以甲醇清洗后溶解于氯仿，依次加入DBU、二乙胺，反应至完全，去除溶剂，剩余物中加入乙腈，析出固体、过滤、以乙腈清洗并干燥，得中间体H-4-hydropro(OtBu)-Arg(Pbf)-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm；

5)将中间体H-4-hydropro(OtBu)-Arg(Pbf)-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm和Fmo c-4-Fphe-OH以CHCl₃溶解，加入HOBt、EDC.HCl，反应至完全，去除溶剂，加入甲醇，析出固体、过滤，固体以甲醇清洗后溶解于氯仿，依次加入DBU、二乙胺，反应至完全，去除溶剂，剩余物中加入乙腈，析出固体、过滤、以乙腈清洗并干燥，得中间体5H-4-Fphe-4-hydropro(OtBu)-Arg(Pbf)-Gly-Trp(Boc)-NH-Dpm；

6)将中间体5H-4-Fphe-4-hydropro(OtBu)-Arg(Pbf)-Gly-Trp(Boc)-NH-Dp m溶解于TFA：H₂O：EDT：PhOMe＝92：2：2：4混合溶液中，反应至完全，将滤液缓慢加入冰乙醚中沉淀、离心、以冰乙醚清洗并干燥得奈米非肽粗品；

7)将步骤6)所得奈米非肽粗品用反相高效液相纯化制备；以反相十八烷基硅烷为固定相，以0.1％醋酸水溶液/乙腈为流动相，收集目的峰馏分，浓缩冻干，得奈米非肽。