[发明专利]一种人体外周血中单核样髓源抑制细胞的检测方法

说明书

本发明的一种人体外周血中单核样髓源抑制细胞的检测方法，使用抗体为：(a)抗体APC anti‑human CD33；(b)抗体PE anti‑human CD15；(c)抗体PE‑CF594 anti‑human HLA‑DR；(d)抗体APC‑H7 anti‑human CD14；(e)抗体PE‑Cy7 anti‑human CD45；(f)抗体FITC anti‑mouse CD11b。制备流式样本溶液；使用流式细胞仪检测流式样本溶液中mo‑MDSCs的比例。对于检测mo‑MDSCs，给出了明确的筛选数值的范围和筛选的具体流程。检测简单、操作方便、检查时间短，仅需要微量的外周血样本标记，费用低廉，易于广泛普及。对151例受试者的外周血血液样本，分别用本发明的方法检测。检测出的mo‑MDSCs比例数值在不同群体中表现出明显的差异，在乳腺癌患者中的比例显著的高于健康人和乳腺良性瘤患者。检测结果通过计算机，使用Graphpad Prism 6软件进行统计分析，P<0.05，具备统计意义，科学可信。

技术领域

本发明涉及一种人体外周血中单核样髓源抑制细胞的检测方法。

背景技术

髓系来源的抑制性细胞（MDSCs）是一群骨髓来源的异质性的细胞，根据其形态和表面标志的差异可以划分为两个亚群：粒细胞样髓源抑制细胞（PMN-MDSCs）和单核样髓源抑制细胞（mo-MDSCs）。其中，mo-MDSCs具有较强的免疫抑制能力¹，机体内存在的mo-MDSCs会影响乳腺癌等疾病的进展和恶化。基于此，对于mo-MDSCs的筛选和检测是十分必要的。

由于MDSCs细胞群缺乏特异性的识别标记物，因此现有的筛选和检测的方法十分混杂。 ALMAND B等人通过多种癌症样本的分析认为Lin⁻HLA-DR⁻可以作为标志物来筛选检测MDSCs细胞群²，DIAZ-MONTERO CM等人的工作则认为可以通过Lin^−/lowHLA-DR⁻CD33⁺CD11b⁺标志组合进行筛选检测³，还有通过CD15⁺从粒细胞群中检测MDSCs细胞群的研究工作等等⁴。但是，现有的MDSCs及mo-MDSCs的检测方法多依赖操作者具有丰富的经验和理论背景基础，未给出mo-MDSCs明确的科学的检测方法。（参考文献：

发明内容

为了解决已有技术存在的问题，本发明提供了一种人体外周血中单核样髓源抑制细胞的检测方法。

本发明提供的一种人体外周血中单核样髓源抑制细胞的检测方法的步骤和条件如下：

A、所用的抗体

(101) 抗体APC anti-human CD33，简称CD33；

(102) 抗体PE anti-human CD15，简称CD15；

(103) 抗体PE-CF594 anti-human HLA-DR，简称HLA-DR；

(104) 抗体 APC-H7 anti-human CD14，简称CD14；

(105) 抗体PE-Cy7 anti-human CD45，简称CD45；

(106) 抗体FITC anti-mouse CD11b，简称CD11b；

B、所用的溶液的制备

(201) PBS溶液的制备：称取NaCl 8 g、KCl 0.2 g、Na₂HPO₄ 1.44 g及KH₂PO₄ 0.24g溶于1 L超纯水中，高压灭菌，得到PBS溶液，4 ℃冰箱保存；