[发明专利]一种野葛柱头可授性的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种野葛柱头可授性的测定方法。

背景技术

野葛是豆科蝶形花亚科多年生藤本落叶植物，又名干葛、葛藤等，素有“北参南葛”、“亚洲人参”之美称，它是国家卫生部批准的药食同源植物，野葛药用具有生津止渴、解肌退热、通经活络、升阳止渴、解酒毒等功效，食用可以做成葛根饮料、葛根保健口服液、葛根保健凉粉等产品，具有很高的药用价值和营养价值，是重要的地区经济作物。迄今为止国内对野葛已有很多研究，但主要集中在药理药效、生态表型等方面，而对其花的繁育特性等方面的研究相对较少。

系统地了解植物花的繁育特性，比如：柱头可授性，是研究植物生活史的前提，也是开展相关研究的基础。研究植物花的繁育特性对于深入了解植物繁殖生物学特性以及植物物种的形成具有重要意义。

植物柱头可授性的检测是植物繁育特性中的一个重要环节，在进行野葛杂交授粉或者人工辅助授粉过程中，通常需要进行柱头可授性的测定。现有技术中比较常用的柱头可授性测定方法是联苯胺-过氧化氢法，其原理是过氧化氢在过氧化氢酶作用下产生强氧化性的氧原子将联苯胺氧化变色并伴有气泡产生，有活力的柱头在滴加该测试溶液后会迅速变色并有气泡产生，无活力的则不会变色且没有气泡产生，根据颜色的变化与气泡的多少可以判断柱头可授性是强还是弱。但该法有一些缺陷和不足，由于结果是目测观察，会产生视觉偏差和记数偏差，不同开花时期，柱头可授性的强弱也不一样，加之联苯胺在低温水里的溶解度较低，这些因素都会影响结果的准确性。因此，使用联苯胺-过氧化氢法测定柱头的可授性，会造成实验偏差，实验结果重复性不好，进而影响结果准确性。设法降低消除上述偏差，找到一种利于测定野葛柱头可授性且实验结果重复性好的方法是本发明要解决的任务。到目前为止，关于野葛柱头可授性的测定方法还未见报道。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种野葛柱头可授性的测定方法。

本发明一种野葛柱头可授性的测定方法，其特征在于包含有以下步骤：

a.制备反应液：将MTT和70.0％-90.0％的混合溶液按1:19比例制成反应液或将1％联苯胺和3％过氧化氢及水按体积4:11:22比例制成联苯胺-过氧化氢反应液；将150-200微升的反应液转移到0.5毫升离心管中，备用；所述的70.0％-90.0％混合溶液为：浓度为70.0％-90.0％的二甲基亚砜(DMSO)或异丙醇或乙醇；所述的MTT为：3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐；

b.野葛柱头的准备：距柱头1.0-2.0厘米切断野葛柱头，备用；

c.吸光值A的测定：将切断的野葛柱头按柱头朝下，倒置放入离心管中，柱头在反应液中浸渍6分钟后，反应液显示出颜色，采用紫外分光光度计对反应液在650纳米波长下进行检测得吸光值A；

d.柱头可授性A值的计算：按照公式：A＝(B1+B2+B3+B4+B5+B6)/6＝B/6计算，同时比较实验结果重复性的好坏；式中B1-B6表示实验重复六次每一次得到的吸光值，B表示六次吸光值B1+B2+B3+B4+B5+B6得到的总和。

本发明一种野葛柱头可授性的测定方法，其特征在于包含有以下步骤：a.制备反应液：将MTT和70.0％-90.0％的混合溶液按1:19比例制成反应液或将1％联苯胺和3％过氧化氢及水按体积4:11:22比例制成联苯胺-过氧化氢反应液；根据柱头的大小将150-200微升的反应液转移到0.5毫升离心管中，备用；所述的70.0％-90.0％混合溶液为：浓度为70.0％-90.0％的二甲基亚砜(DMSO)或异丙醇或乙醇；所述的MTT为：3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐；

b.野葛柱头的准备：采集不同时期的野葛花，在将要准备测定柱头可授性时，距柱头1.0-2.0厘米处切断野葛柱头备用，以保证实验材料的新鲜度和活力度；

c.吸光值A的测定：将切断的野葛柱头按柱头朝下，倒置放入离心管中，柱头在反应液中浸渍6分钟后，反应液显示出颜色，采用紫外分光光度计对反应液在650纳米波长下进行检测得吸光值A；

d.柱头可授性A值的计算：

按照公式：A＝(B1+B2+B3+B4+B5+B6)/6＝B/6计算，同时比较实验结果重复性的好坏；式中B1-B6表示实验重复六次每一次得到的吸光值，B表示六次吸光值B1+B2+B3+B4+B5+B6得到的总和。

柱头可授性是衡量植物繁育特性的主要标志，在进行野葛杂交授粉或者人工辅助授粉过程中，鉴定其柱头可授性能够减少不必要的损失。