[发明专利]Glypican‑1蛋白在胰腺癌诊断中的应用、阳性外泌体浓度的检测方法及其用途

权利要求书

1.一种Glypican-1蛋白的用途，其特征在于，用于制备诊断胰腺癌的产品。

2.根据权利要求1所述的Glypican-1蛋白的用途，其特征在于，所述产品为芯片、检测试剂或检测试剂盒。

3.根据权利要求2所述的Glypican-1蛋白的用途，其特征在于，所述芯片包括蛋白芯片，所述检测试剂盒包括蛋白免疫检测试剂盒。

4.一种Glypican-1阳性外泌体浓度的检测方法，其特征在于，为纳米等离子体增强散射方法。

5.根据权利要求4所述的Glypican-1阳性外泌体浓度的检测方法，其特征在于，所述纳米等离子体增强散射方法所用检测试剂包括以下组成：

（Ⅰ）氨基功能化的玻璃载片、甲醇、氮气流、50孔聚二甲基硅氧烷膜；

（Ⅱ）磷酸盐缓冲洗涤液，pH值为7.4，其成分为：140mM NaCl，2.7mM KCl，10mM Na₂HPO₄，1.8mM KH₂PO₄；

（Ⅲ）封闭液为含5%牛血清蛋白的PBS，pH值为7.4，其成分为：PBS，5%BSA；

（Ⅳ）羧基功能化的金纳米颗粒：50nm金纳米球、25×60nm金纳米棒；

（Ⅴ）MES溶液，pH值为4.7，其成分为：2-（N-吗啉代）乙磺酸，用纯水配制；

（Ⅵ）浓度为5mM的EDC/PBS溶液、EDC / NHS溶液， EDC系羟基胶乳微球偶联抗体，成分为1-乙基-3-（3二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐，浓度为2mg/ml；NHS的浓度为1mg/ml；

（Ⅶ）偶联缓冲液；

（Ⅷ）抗体溶液：抗-CD63、抗-CD9、抗Glypican-1；浓度为0.5 mg/ml；

（Ⅸ）标准品：已知质量的标准Glypican-1+exo样品溶解于无exosome的血浆中，浓度为1 μg/ml，并稀释至所需浓度；

（Ⅹ）淬灭缓冲液：浓度为2 mM的硫酸水溶液。

6.根据权利要求5所述的Glypican-1阳性外泌体浓度的检测方法，其特征在于，所述纳米等离子体增强散射方法的步骤为：在NH2功能化的玻片上，覆盖50孔聚二甲基硅氧烷膜，形成感应芯片，在感应芯片上用外泌体特异抗体-抗CD63覆盖，封闭后加入待测样品孵育，洗板，再加偶联了抗CD9抗体的金纳米棒和偶联了抗Glypican-1抗体的金纳米球，孵育，洗板后在暗场显微镜下获得图像；通过计算机软件分析整个图像，以给出指示Glypican-1阳性外泌体浓度的nPES信号的面积比，通过标准品的浓度和相应的nPES信号绘制标准曲线，待检样品中的Glypican-1阳性外泌体的水平通过它的信号值并对应标准曲线得到。