[发明专利]一种分泌抗总黄曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明提供了一种分泌抗总黄曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株F‑3‑1，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13806。此细胞株分泌的抗总黄曲霉毒素单克隆抗体灵敏度高、特异性好、抗干扰性好，对黄曲霉毒素B₁的50％抑制浓度IC₅₀为0.046μg/L，与AFB₂的交叉反应率为110％，与AFG₁的交叉反应率为96％，与AFG₂的交叉反应率为78％，对中药中可能存在的真菌毒素、农药、重金属、炮制过程中使用的辅料及污染菌等均具有较好的抗干扰性，为中药中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂总量的免疫检测提供了条件，具有实际应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种分泌抗总黄曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

中药材从生产、采收、加工、运输、贮藏等过程均有可能因自身性质与外界因素的影响而污染真菌，进而发生霉变并污染真菌毒素。霉变不仅会影响中药材的质量，使药材失去原有的药用价值，造成巨大的经济损失，而且在霉变过程中，产生的多种真菌毒素会对患者的肝、肾、神经和造血系统等造成严重的损害，甚至可能诱发癌症。同时，随着当今中医药保健养生观念的普及，越来越多“药食同源”的大宗中药材被用于人们日常的饮食和保健当中，市场的需求量大，若这些中药材受到真菌毒素的污染，则势必会危害更多的人群的健康，加重个人和医疗系统的经济负担，更有可能进一步影响社会的和谐和稳定。

黄曲霉毒素(Aflatoxins，简称AFs)主要是由黄曲霉A.flavus和寄生曲霉A.parasiticus产生的一类具有生物活性的有毒次生代谢产物，目前已经证实有17种AFs相关的衍生物，包括黄曲霉毒素B₁(AFB₁)、B₂(AFB₂)、G₁(AFG₁)和G₂(AFG₂)，而其中又以AFB₁的毒性最强，因此1993年世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构(IARC)将其划定为Ⅰ类致癌物，而另外三种黄曲霉毒素AFB₂、AFG₁和AFG₂先后也被划分为2B类致癌物。鉴于AFs具有极强的毒性作用，且对人和动物的危害性大，世界各国及相关组织纷纷制定了严苛的限量标准。《中华人民共和国药典》(2015版)要求对部分中药材如远志、大枣、肉豆蔻、决明子、麦芽、陈皮、使君子、柏子仁、胖大海、莲子、桃仁、槟榔、酸枣仁、薏苡仁等必需开展黄曲霉毒素检测，并规定AFG₂、AFG₁、AFB₂、AFB₁总量不得超过10μg/kg。

目前中药中黄曲霉毒素的检测方法主要是仪器分析方法，包括薄层色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等。薄层色谱法检测方便，但检测限高，不能很好地定量；高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等检测准确、检测限低，但需要复杂的样品前处理过程、专门的仪器以及专业的人员培训。仪器分析方法的这些先天性不足，使其在实际应用中受到了很大的限制。

免疫分析法可以弥补以上所有缺点，免疫分析法是一种利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质的分析方法，建立小分子化合物的免疫分析方法的关键是能够制造出对小分子化合物具有高亲和力和高特异性的抗体。

发明内容

本发明的目的是提供一种分泌抗总黄曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该细胞株制备的单克隆抗体对AFB₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂均具有较好的特异性和较高的检测灵敏度，对中药中可能存在的真菌毒素、农药、重金属、炮制过程中使用的辅料及污染菌等均具有较好的抗干扰性，为建立中药中黄曲霉毒素总量的免疫学检测方法奠定基础。