[发明专利]一种利用DNA甲基化抑制剂构建植物群体的方法

权利要求书

1.一种利用DNA甲基化抑制剂构建植物群体的方法，其包括以下步骤：

(1)外植体的选择、消毒预处理和培养；

(2)无菌苗的扩繁；

(3)无菌叶片的选择及预处理；

(4)无菌叶片甲基化抑制剂处理；

(5)再生芽的生根培养；

(6)再生植株的温室移栽；

其中，所述DNA甲基化抑制剂为5-氮杂胞苷(5-azaC)。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中外植体的选择是剪取半木质化的新发枝条，剪去叶片，清洗后，放入超净工作台；外植体的消毒预处理为剪取5cm左右的茎段，采用75％的酒精灭菌30秒，10％的次氯酸钠消毒8-10分钟，用无菌水冲洗外植体3次，灭菌滤纸吸干；外植体的培养是将消毒灭菌后的外植体接种在MS启动培养基中。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤(1)中在对外植体进行培养之前，还包括在无菌条件下将外植体材料上与消毒剂接触过的界面进行切除的步骤。

4.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(2)中无菌苗的扩繁是切取上述茎段外植体上生长的1-1.5cm高的芽，接种在生根培养基中，所述生根培养基为1/2MS+IBA0.01mg/L+NAA0.01mg/L+蔗糖25g/L+植物凝胶2.5g/L。

5.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(3)中无菌叶片的选择是选择中上部完全展开的叶片；无菌叶片的预处理是在无菌条件下，用医用手术刀切去0.2mm左右的叶片边缘，并垂直于叶脉划3-4个0.5cm左右的伤口。

6.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(4)中无菌叶片甲基化抑制剂处理是将划伤的叶片放置在添加不同浓度5-azaC的分化培养基上进行处理，5-azaC的浓度分别为0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L、800μmol/L和1000μmol/L，分化培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA0.03mg/L+蔗糖30g/L+植物凝胶2.5g/L。

7.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(5)中再生芽的生根培养是将0.5-1.0cm的再生芽切下，接种到生根培养基中，所述生根培养基为1/2MS+IBA0.01mg/L+NAA0.01mg/L+蔗糖25g/L+植物凝胶2.5g/L。

8.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(6)中再生植株的温室移栽是将生根良好、苗高5cm左右的再生植株根系上的培养基彻底清洗，移栽到全自动温室中，营养钵土壤配方为腐殖土6份、珍珠岩2份、河沙2份。

9.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中培养外植体和处理后叶片的环境条件为光周期16h/8h、光照强度2500Lux、温度27℃/21℃。

10.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中外植体为杨树外植体，优选为欧洲黑杨外植体。