[发明专利]一种重组酿酒酵母及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种重组酿酒酵母菌株，其特征在于，包含经优化的不同来源的TAL基因、4CL基因、CHS基因、CHI基因和N8DT基因，所述TAL基因为圆红冬孢酵母来源TAL基因序列；所述4CL基因为欧芹来源4CL基因序列；所述CHS基因为拟南芥来源CHS基因序列；所述CHI基因为蜜柑来源CHI基因序列；所述N8DT基因为苦参来源N8DT基因序列；所述经优化为经过酿酒酵母密码子优化并规避BsaⅠ限制性内切酶酶切位点，同时在基因两端分别添加SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示；

所述TAL基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述4CL基因的核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示；所述CHS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述CHI基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；所述N8DT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示。

2.权利要求1所述重组酿酒酵母菌株的构建方法，将经优化的TAL基因、4CL基因、CHS基因、CHI基因和N8DT基因整合到酿酒酵母底盘菌株基因组中。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述酿酒酵母底盘菌株为酿酒酵母CEN.pK2-1d。

4.权利要求1所述的重组酿酒酵母菌株在生产8-二甲基异戊烯基柚皮素中的应用。

5.一种生产8-二甲基异戊烯基柚皮素的方法，其特征在于，将权利要求1所述的重组酿酒酵母菌株接入种子培养基活化；将活化后的菌株接种于发酵培养基中发酵培养，发酵培养后收集菌体细胞提取8-二甲基异戊烯基柚皮素。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，具体为将权利要求1所述的重组酿酒酵母菌株接入种子培养基在30℃、250rpm活化24h，转接至新鲜的种子培养基，在30℃、250rpm活化18h，转接至发酵培养基30℃、250rpm发酵96h，收集菌体提取8-二甲基异戊烯基柚皮素。

7.根据权利要求5或6所述方法，其特征在于，所述种子培养基为22g/L葡萄糖、6.7g/LYNB、2g/L缺异亮氨酸的混合氨基酸粉末，余量为水；所述发酵培养基为20g/L葡萄糖、6.7g/L YNB、2g/L缺异亮氨酸的混合氨基酸粉末、0.5g/L酪氨酸，余量为水。