[发明专利]胆固醇转脂酶SOAT1被抑制的CAR‑T细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.胆固醇转脂酶SOAT1被抑制的CAR-T细胞，其特征在于，包括如下细胞：

胆固醇转酯酶SOAT1基因DNA水平敲除的表达hCAR19受体的T细胞，即hCAR19-KO^SOAT1-T细胞；

胆固醇转酯酶SOAT1基因mRNA水平敲减的表达hCAR19受体的T细胞，即hCAR19-shRNA^SOAT1-T细胞；

胆固醇转酯酶SOAT1基因在蛋白质水平受到抑制剂抑制作用的表达hCAR19受体的T细胞，即hCAR19-Inhibitor^SOAT1-T细胞。

2.如权利要求1所述的CAR-T细胞，其特征在于，所述胆固醇转酯酶SOAT1基因DNA水平敲除的表达hCAR19受体的T细胞，采用的DNA水平敲除方法通过Cas9、ZFN或TALEN基因敲除方法来实现。

3.如权利要求2所述的CAR-T细胞，其特征在于，所述采用的DNA水平敲除方法通过Cas9基因敲除方法来实现，具体为：通过对人SOAT1外显子序列分析，首先，选定基因敲除的位点；随后，通过靶点长度、鸟嘌呤和胞嘧啶碱基对的含量、前间区序列邻近基序模式、潜在脱靶位点筛选条件，最终选出6条靶点序列及一条阴性对照序列，具体序列如下：

6条靶点序列如下：

SOAT1-target1-F：如SEQ ID NO.4所示；

SOAT1-target1-R：如SEQ ID NO.5所示；

SOAT1-target2-F：如SEQ ID NO.6所示；

SOAT1-target2-R：如SEQ ID NO.7所示；

SOAT1-target3-F：如SEQ ID NO.8所示；

SOAT1-target3-R：如SEQ ID NO.9所示；

SOAT1-target4-F：如SEQ ID NO.10所示；

SOAT1-target4-R：如SEQ ID NO.11所示；

SOAT1-target5-F：如SEQ ID NO.12所示；

SOAT1-target5-R：如SEQ ID NO.13所示；

SOAT1-target6-F：如SEQ ID NO.14所示；

SOAT1-target6-R：如SEQ ID NO.15所示；

一条阴性对照序列如下：

SOAT1-target7-F：如SEQ ID NO.16所示；

SOAT1-target7-R：如SEQ ID NO.17所示；

上述任一所示核苷酸序列用于慢病毒表达载体上，或用于逆转录病毒表达载体、腺病毒表达载体、腺相关病毒表达载体或其它类型的表达载体上。

4.如权利要求3所述的CAR-T细胞，其特征在于，所述选出的靶点序列为如下序列：

SOAT1-target3-F：如SEQ ID NO.8所示；

SOAT1-target3-R：如SEQ ID NO.9所示。