[发明专利]胆固醇转脂酶SOAT1被抑制的CAR‑T细胞及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于医学生物领域，具体涉及一种针对肿瘤免疫治疗的CAR-T细胞，尤其涉及胆固醇转脂酶SOAT1(sterol O-acyltransferase 1，gene ID:6646)被抑制的CAR-T细胞。此外，本发明还涉及该细胞的制备方法和应用。

背景技术

肿瘤免疫治疗的理论基础是免疫系统具有识别肿瘤相关抗原、调控机体攻击肿瘤细胞(高度特异性的细胞溶解)的能力。1950年代，Burnet和Thomas提出了“免疫监视”理论，认为机体中经常会出现的突变的肿瘤细胞可被免疫系统所识别而清除，为肿瘤免疫治疗奠定了理论基础[Burnet FM.Immunological aspects of malignant disease.Lancet,1967；1:1171-4]。随后，各种肿瘤免疫疗法包括细胞因子疗法、单克隆抗体疗法、过继免疫疗法、疫苗疗法等相继应用于临床。

2013年一种更先进的肿瘤免疫疗法---CAR-T疗法成功用于临床，并表现了前所未有的临床疗效。CAR-T，全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。该疗法是通过转基因的手段，将启动子、抗原识别区、共刺激因子、效应区等共同组成的嵌合分子，导入T细胞基因组内，从而使T细胞对靶细胞的识别、信号转导、杀伤等功能融为一体，实现了对靶细胞的特异性杀伤[Eleanor J.Cheadle,et al.CAR T cells:driving the road from the laboratory to the clinic.Immμnological Reviews 2014.Vol.257:91–106]。CAR-T疗法在临床上最领先的有诺华的CLT019，采用CLT019治疗复发难治急性淋巴细胞白血病患者，六个月的肿瘤无进展生存率达到67％，其中最长的应答时间达到两年多。总部位于中国上海的上海优卡迪生物医药科技有限公司与医院合作，截止到2017年2月，共治疗复发难治急性淋巴细胞白血病患者36例，其中完全24例，缓解比例达到66.6％。这是抗癌研究的颠覆性突破。CAR-T细胞疗法可能是最有可能治愈癌症的手段之一，并被《Science》杂志评为2013年度十大科技突破之首。

CAR-T目前在在治疗B-ALL等几种类型的血液肿瘤方面疗效显著，但是在骨髓瘤、淋巴瘤甚至实体瘤方面，目前治疗效果不是很好，主要原因可能有以下几点：一、以氧化应激，营养缺乏，酸性pH值以及缺氧为主特征的肿瘤微环境；二、肿瘤细胞分泌的免疫抑制性因子的存在；三、抑制性免疫细胞的抑制作用，例如调节性T细胞(Treg)、髓养前体抑制性细胞(MDSC)、肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)、未成熟的树突状细胞(iDC)等等；四、T细胞固有的免疫检查点调节机制。因此，增强CAR-T细胞的治疗活性成为了CAR-T细胞免疫治疗术走向下一个胜利的关键。

通过对过继性T细胞免疫治疗(Adoptive T-cell Immunotherapy)中的肿瘤浸润性T细胞(Tumor infiltrating lymphocytes,TIL)的研究表明，当T细胞在肿瘤组织中被激活后，细胞内的合成代谢将十分旺盛，以适应急剧增加的物质和能量需求[Kidani Y,Elsaesser H,Hock MB,et al.Sterol regulatory element-binding proteins are essential for the metabolic programming of effector T cells and adaptive immunity.[J].Nature immunology,2013,14(5):489-499.]。作为细胞代谢中的重要组份，多种脂质合成代谢通路在激活的T细胞中重新编程并迅速上调[Bensinger SJ,Bradley MN,Joseph SB,et al.LXR signaling couples sterol metabolism to proliferation in the acquired immune response.[J].Cell,2008,134(1):97-111.]。早期的同位素富集(isotopomer-enrichment)实验证实激活的淋巴细胞可以导致其内胆固醇和脂肪酸的快速合成。在培养基中添加胆固醇替代物(Oxysterols)可以减弱脂质合成代谢并使细胞停滞在G1期，说明脂质代谢可影响细胞增殖。