[发明专利]一种碱基编辑系统及其构建和应用方法

权利要求书

1.一种碱基编辑系统，其特征在于，包括尿嘧啶糖苷酶抑制剂(uracil glycosylaseinhibitor，UGI)表达载体或其转录产物和碱基编辑器3(base editor 3，BE3)表达载体或其转录产物，或包括尿嘧啶糖苷酶抑制剂(uracil glycosylase inhibitor，UGI)和碱基编辑器3(base editor 3，BE3)共表达载体或其转录产物，所述共表达载体利用T2A自剪切肽段在BE3编码区下游同框接入UGI基因；以及还包括针对某物种的基因组靶点的sgRNA表达载体。

2.如权利要求1所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述的UGI和BE3共表达载体为增强型CRISPR碱基编辑器eBEa表达载体，其序列为SEQ ID NO:22。

3.如权利要求1所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述的UGI和BE3共表达载体为增强型CRISPR碱基编辑器eBEb表达载体，其序列为SEQ ID NO:23。

4.如权利要求1所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述的UGI表达载体的序列包括SEQID NO:20。

5.如权利要求1所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述的碱基编辑系统还包括真核细胞和基因转导试剂。

6.权利要求1-5中任一项所述的碱基编辑系统的构建方法，其特征在于，包括扩增UGI基因，并连入真核表达载体中，得到UGI表达载体；或利用PCR方法扩增T2A-UGI编码序列，并同框连入BE3编码区的下游，得到增强型CRISPR碱基编辑器eBEa表达载体；或人工合成3×T2A-UGI编码序列，PCR扩增后同框连入BE3编码区的下游，得到增强型CRISPR碱基编辑器eBEb表达载体。

7.权利要求1-5中任一项碱基编辑系统的应用方法，其特征在于，包括构建针对某物种的基因组DNA靶点的sgRNA；在真核细胞中共引入sgRNA，BE3表达载体或其转录产物以及UGI表达载体或其转录产物，或者，在真核细胞中共引入sgRNA以及UGI和BE3共表达载体或其转录产物，使其在靶点基因组DNA发生C-T碱基编辑。

8.如权利要求7所述的碱基编辑系统的应用方法，其特征在于，还包括：对处理后的真核细胞基因组DNA进行抽提，然后利用针对靶点的特异性引物进行PCR扩增，利用基因组DNA的PCR产物构建高通量二代DNA测序文库，并进行高通量二代DNA测序。

9.如权利要求7所述的碱基编辑系统的应用方法，其特征在于，所述的某物种的基因组DNA靶点为人的FANCF或RNF2靶点。