[发明专利]一种快速检测鸽子性别的引物及其试剂盒和应用以及检测方法

权利要求书

1.一种快速检测鸽子性别的引物，其特征在于所述的引物为LAMP引物，其序列为：

上游外引物FIP序列

CCAGTCTTTTCCTGTATGTAAAATTAAGAAGCCTTGATCTTTACCA；

上游内引物BIP序列

CTGATGAATTAGAAAGATGAAGTGTCAAAACAACTGAGGGGGT；

下游外引物F3序列CAGGTGAGAATTTTTCTGGTA；

下游外引物B3序列AGCAACTTTAATTCTCAATTGC。

2.含有权利要求1所述引物的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还包括鸽子羽髓DNA的快速提取液、LAMP反应液和显色剂、阳性对照模板DNA和去离子水。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述的鸽子羽髓DNA的快速提取液由Tris-buffer、DTT和蛋白酶K构成。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述的显色剂为钙黄绿素荧光染料。

6.如权利要求2所述的试剂盒应用，其特征在于它用于检测鸽子性别，以及鉴定含Z和W染色体的鸟类和禽类的雌雄性别。

7.一种快速检测鸽子性别的方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：

一、提取鸽子羽髓样品的总DNA，作为LAMP反应模板；

二、使用如权利要求2所述试剂盒，构建LAMP反应体系；

三、步骤二所述的LAMP反应体系的模板包括LAMP反应模板、阳性对照DNA模板和去离子水作为阴性对照模板；

四、将步骤二的LAMP反应体系，置于60～65℃水浴中，反应60～120分钟，得到反应液；

五、对步骤四的反应液在80～100℃处理10分钟，灭活Bst DNA聚合酶；

六、向步骤五处理后的反应液中加入显色剂，进行检测结果判定：若为绿色，则待测样品性别为雌性；若为桔黄色，则待测样品性别为雄性。

8.根据权利要求7所述的一种快速检测鸽子性别的方法，其特征在于步骤一提取鸽子羽髓样品的总DNA的操作如下：

将鸽子羽髓样品加入到装有100μL鸽子羽髓DNA的快速提取液的eppendorf管中，然后加热至56℃保持30分钟，期间震荡2次；再升温至100℃保持8分钟，期间震荡1次，提取总DNA，并作为LAMP反应模板。

9.根据权利要求7所述的一种快速检测鸽子性别的方法，其特征在于步骤二的LAMP反应体系为20μL，包括：

2×LAMP Mix反应缓冲液10μL，引物混合物4μL，FIP、BIP引物终浓度0.8μM，F3、B3引物终浓度0.2μM，8U/μL Bst DNA聚合酶1.5μL，25mM MgCl₂ 3μL，模板2μL。

10.一种快速检测鸽子性别的方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：

一、提取鸽子羽髓样品的总DNA，作为LAMP反应模板；

二、使用如权利要求2所述试剂盒，构建LAMP反应体系；

三、步骤二所述的LAMP反应体系的模板包括LAMP反应模板、阳性对照DNA模板和去离子水作为阴性对照模板；

四、将步骤二的LAMP反应体系，置于60～65℃水浴中，反应60～120分钟，得到反应液；

五、对步骤四的反应液在80～100℃处理10分钟，灭活Bst DNA聚合酶；

六、对步骤五处理后的反应液进行琼脂糖凝胶电泳检测，检测结果判定：若电泳结果为梯状条带，则待测样品性别为雌性；若电泳结果为无条带，则待测样品性别为雄性。