[发明专利]用于红树苺离体叶片的产生不定芽培养基、培养方法及其应用

权利要求书

1.一种用于红树苺离体叶片的产生不定芽培养方法，其特征是：其步骤是：选取红树苺离体叶片，植入到不定芽诱导培养基进行培育，形成[微软中国1] ，形[微软中国2] 植入到生根培养基进行培育，形成试管生根小植株，不定芽诱导培养基设置为：MS + 3.0~10.0 mg/L 2ip + 0.1~0.5mg/L IBA + 20g/L~40g/L 蔗糖或 MS + 1~5 mg/L BA + 0.1~0.5 mg/L IBA + 20 g/L~40 g/L 蔗糖或 MS + 0.1~4 mg/L TDZ + 0.1~0.5 mg/L IBA + 20 g/L~40 g/L 蔗糖或NN69 + 1~5 mg/L BA + 0.1~0.5 mg/L IBA + 20 g/L~40 g/L 蔗糖，生根培养基设置为1/4 MS + 0.1～1 mg/L IBA + 20 g/L蔗糖。

2.根据权利要求1所述的用于红树苺离体叶片的产生不定芽培养方法，其特征是：不定芽诱导培养基设置为：MS + 3.0~10.0 mg/L 2ip + 0.1~0.5mg/L IBA + 20g/L~40g/L 蔗糖。

3.根据权利要求1所述的用于红树苺离体叶片的产生不定芽培养方法，其特征是：其步骤是：

一、培养条件

实验中所用的培养基都在灭菌前调pH值到5.8，然后在置121℃，1个大气压下高压灭菌20分钟，培养室培养温度为25 ± 2℃，光照强度为3200勒克斯（Lx），光照周期为16小时/天，

二、叶片培养

选择红树苺品种‘费尔杜德（Fertod Zamatos）’，

a、试管苗继代增殖：

试管苗在继代增殖培养基上进行继代增殖，获得健壮生长用于取叶的足够试材，继代增殖培养基设置为MS + 0.5~1.5 mg/L BA + 0.01~0.5 mg/L IBA + 6 g/L 琼脂 + 30 g/L 蔗糖，

b、离体叶片培养诱导产生不定芽：

试管苗在继代增殖培养基上生长4－5周，此时切取健壮绿苗顶端刚展开幼嫩叶片，用无菌手术刀片垂直于叶片中脉横切伤，根据叶片大小切3－6刀，至少一边的叶缘不切断，保持叶片是一个带多个伤口的完整叶片，把切好的叶片接种在不定芽诱导培养基，诱导产生不定芽绿苗，不定芽诱导培养基设置为：MS + 3.0~10.0 mg/L 2ip + 0.1~0.5mg/L IBA + 20g/L~40g/L 蔗糖或 MS + 1~5 mg/L BA + 0.1~0.5 mg/L IBA + 20 g/L~40 g/L 蔗糖或 MS + 0.1~4 mg/L TDZ + 0.1~0.5 mg/L IBA + 20 g/L~40 g/L 蔗糖或NN69 + 1~5 mg/L BA + 0.1~0.5 mg/L IBA + 20 g/L~40 g/L 蔗糖，

c、不定芽绿苗生根:

切取生长高度在1.5 厘米以上的不定芽绿苗转移到生根培养基上进行生根培养,培养条件为先连续暗培养7天，然后转到16小时光周期培养条件下培养，形成试管生根小植株，生根培养基设置为1/4 MS(MS无机成分减少到原来的1/4) + 0.1～1 mg/L IBA + 20 g/L蔗糖。