[发明专利]用于红树苺离体叶片的产生不定芽培养基、培养方法及其应用

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种产生不定芽培养基、培养方法及其应用，尤其是一种用于红树苺离体叶片的产生不定芽培养基、培养方法及其应用。

二、背景技术

植物离体叶片不定芽再生是诱变育种、体细胞变异筛选、嵌合体分离等细胞工程育种的基础，也是遗传转化操作、外源基因转移等基因工程育种的基础，和在一个新品种或新材料较少时实现植物新品种快速繁殖的基础，因此植物叶片的离体培养被广泛应用于植物的新种质创制及新品种的培育中。

植物叶片培养始于20世纪50年代，第一个获得叶片培养成功的植物种是紫箕，之后，随着研究的深入，培养基成分得到不断的改良和完善，叶片培养成功的植物种越来越多，特别是离体体细胞诱变育种技术及植物遗传工程育种技术的应用和发展，使叶片培养研究越来越受到植物育种家的重视，因为离体体细胞诱变和植物遗传转化操作的成功应用依赖于离体叶片高效不定芽再生体系的建立，现有的植物叶片培养，获得不定芽再生成功的植物种类也在与日俱增，但由于不同物种遗传背景的复杂性，至今还不能实现对所有植物种的叶片培养再生，即使已成功的物种，由于不同类型和不同品种其基因型的差异，其再生的难易和所需的培养基条件也存在较大差异；特别是一些果树的品种其基因型高度杂合，品种之间遗传背景差异较大，很难获得同种多个品种都能成功的培养基，因此现有的组培技术都是对特定物种的类型或品种是适宜的，换一个品种或类型可能就是不适宜的或说不是最佳的，

例如树苺现在已获得了很多品种或类型绿苗的组培快繁成功，但叶片培养获得不定芽的还没有取得技术上的完全成功，现有的不同红树苺品种叶片再生不定芽的最有效植物生长调节物质都是TDZ，但再生率差异较大，对红树苺品种‘费尔杜德（Fertod Zamatos）’进行再生不定芽的诱导，不能完成不定芽再生。

基于现有的技术问题、技术特征和技术效果，做出本发明的申请技术方案。

三、发明内容

本发明的客体是一种用于红树苺离体叶片的产生不定芽培养基，

本发明的客体是一种用于红树苺离体叶片的产生不定芽培养方法，

本发明的客体是一种用于红树苺离体叶片的产生不定芽培养基和培养方法的应用。

为了克服上述技术缺点，本发明的目的是提供一种用于红树苺离体叶片的产生不定芽培养基、培养方法及其应用，因此利于品种快速繁殖育苗和品种的改良。

为达到上述目的，本发明采取的技术方案是：一种用于红树苺离体叶片的产生不定芽培养方法，其步骤是：选取红树苺离体叶片，植入到不定芽诱导培养基进行培育，形成不定芽绿苗，把不定芽绿苗植入到生根培养基进行培育，形成试管生根小植株，不定芽诱导培养基设置为：MS + 3.0~10.0 mg/L 2ip + 0.1~0.5mg/L IBA + 20g/L~40g/L 蔗糖或 MS + 1~5 mg/L BA + 0.1~0.5 mg/L IBA + 20 g/L~40 g/L 蔗糖或 MS + 0.1~4 mg/L TDZ + 0.1~0.5 mg/L IBA + 20 g/L~40 g/L 蔗糖或NN69 + 1~5 mg/L BA + 0.1~0.5 mg/L IBA + 20 g/L~40 g/L 蔗糖，生根培养基设置为1/4 MS + 0.1～1 mg/L IBA + 20 g/L蔗糖。

由于设计了6－苄基氨基嘌呤（BA）、噻苯隆（TDZ）、 异戊烯基腺嘌呤（2ip）和吲哚丁酸（IBA），通过6－苄基氨基嘌呤（BA），噻苯隆（TDZ）， 异戊烯基腺嘌呤（2ip）和吲哚丁酸（IBA）两种以上的植物生长调节物质在不定芽诱导培养基的作用，因此实现了对红树苺离体叶片的产生不定芽培养。

本发明设计了，不定芽诱导培养基设置为：MS + 3.0~10.0 mg/L 2ip + 0.1~0.5mg/L IBA + 20g/L~40g/L 蔗糖。

本发明设计了，其步骤是：

一、培养条件

实验中所用的培养基都在灭菌前调pH值到5.8，然后在置121℃，1个大气压下高压灭菌20分钟，培养室培养温度为25 ± 2℃，光照强度为3200勒克斯（Lx），光照周期为16小时/天，

二、叶片培养

选择红树苺品种‘费尔杜德（Fertod Zamatos）’，

a、试管苗继代增殖：