[发明专利]一种表达载体及其在植物基因功能研究中的应用

权利要求书

1.一种特异表达载体：包括如下元件：LB序列、RB序列、抗性筛选基因甲、抗性筛选基因乙、启动子、终止子和特异DNA分子；所述特异DNA分子中具有两个sfiI酶切位点；所述特异表达载体中，所述特异DNA分子以外的其它部分不具有sfiI酶切位点；所述启动子、所述特异DNA分子和所述终止子处于同一表达盒，且自上游至下游依次为：所述启动子、所述特异DNA分子和所述终止子；

所述特异DNA分子如序列表的序列1自5’端第2568-2605位核苷酸所示。

2.如权利要求1所述的特异表达载体：其特征在于：所述抗性筛选基因甲为Bar基因；所述抗性筛选基因乙为卡那霉素抗性基因。

3.如权利要求1或2所述的特异表达载体：其特征在于：所述启动子为35S启动子；所述终止子为NOS终止子。

4.如权利要求1或2所述的特异表达载体，其特征在于：所述特异表达载体为序列表的序列1所示的环形质粒。

5.一种试剂盒，包括权利要求1-4中任一所述的特异表达载体；所述试剂盒的功能为如下（a1）或（a2）：

（a1）构建植物cDNA文库；

（a2）研究植物基因功能；

所述植物为大豆、油菜、花生、芝麻或拟南芥。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述研究植物基因功能为挖掘植物新基因并验证其功能。

7.权利要求1-4中任一所述的特异表达载体，或，权利要求5所述的试剂盒的应用，为如下（b1）或（b2）：

（b1）构建植物cDNA文库；

（b2）研究植物基因功能；

所述植物为大豆、油菜、花生、芝麻或拟南芥。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述研究植物基因功能为挖掘植物新基因并验证其功能。

9.一种植物cDNA文库的构建方法，包括如下步骤：（1）提取植物总RNA；（2）以所述总RNA为模板，采用引物5SM4Z、引物5SM4ZA和引物5SM4ZB进行反转录，得到第一链cDNA；（3）将第一链cDNA均一化，得到均一化cDNA；（4）采用限制性内切酶sfiI酶切均一化cDNA，得到酶切产物；（4）将权利要求1-4任一所述的表达载体采用限制性内切酶sfiI酶切，得到载体骨架；（5）将所述酶切消化产物和所述载体骨架连接，得到植物cDNA文库；

所述引物5SM4Z如序列表的序列2所示；

所述引物5SM4ZA如序列表的序列3所示；

所述引物5SM4ZB如序列表的序列4所示；

所述植物为大豆、油菜、花生、芝麻或拟南芥。

10.权利要求9所述的方法的应用，为如下（c1）和/或（c2）：

（c1）研究植物基因功能；

（c2）挖掘植物新基因；

所述植物为大豆、油菜、花生、芝麻或拟南芥。

11.一种植物基因功能的研究方法，包括如下步骤：按照权利要求9所述的方法构建植物cDNA文库，将所述cDNA文库转化农杆菌，得到重组农杆菌；将所述重组农杆菌转化目的植物，通过同时对插入载体骨架的DNA片段进行序列分析和观察转化植物的表型，对植物基因功能进行研究；

所述植物为大豆、油菜、花生、芝麻或拟南芥。