[发明专利]一种表达载体及其在植物基因功能研究中的应用

说明书

本发明公开了一种表达载体及其在植物基因功能研究中的应用。本发明提供了一种特异表达载体：包括如下元件：LB序列、RB序列、抗性筛选基因甲、抗性筛选基因乙、启动子、终止子和特异DNA分子；所述特异DNA分子中具有两个sfiI酶切位点；所述特异表达载体中，所述特异DNA分子以外的其它部分不具有sfiI酶切位点；所述启动子、所述特异DNA分子和所述终止子处于同一表达盒，且自上游至下游依次为：所述启动子、所述特异DNA分子和所述终止子。通过使用本发明的特异表达载体构建大豆全长cDNA文库，然后转化拟南芥，获得众多表型，本发明可用于进行植物功能基因组的研究。

技术领域

本发明涉及一种表达载体及其在植物基因功能研究中的应用。

背景技术

基因是存在于染色体上的一段DNA序列，生物的性状都是由基因的表达与否控制的。研究基因的功能不仅可以获取基因的具体生物学信息，更可以直接进行操作和改良，为人类生活和健康提供服务。随着科学技术的进步和生物学的迅猛发展，许多模式生物的基因功能已被解析。在国际上，酵母全基因组基因缺失突变体已经构建完成；在线虫以及果蝇中，利用不同的功能基因组学方法也阐明了许多基因的功能。近年来，在植物的模式生物拟南芥和水稻中，功能基因组学也取得了瞩目的成就。但是，对于大多数不是模式生物的作物，功能基因组学研究显得相对滞后。大豆在我国国民经济中占据重要地位，为我们提供丰富的蛋白质资源和油料品种。但由于大豆基因组结构庞大，同时也是4倍体作物，含有大量非编码序列冗余重复基因，所以对其功能基因组研究显得十分滞后。

大规模研究基因功能的方法有正向遗传学和反向遗传学。正向遗传学从表型入手，构建群体定位基因，最后阐明基因功能，比如EMS诱变等，但这种方法耗时，效率偏低，仅仅依靠EMS诱变已不能满足快速有效分析基因功能的需求。反向遗传学从突变的基因入手，寻找表型，最后解释基因功能，如建立T-DNA插入突变体库等，但这种方法在基因冗余程度高的物种中不好应用。

cDNA文库是表达基因的集合，建立全长cDNA文库，从全长cDNA文库中大规模发掘寻找基因功能是一个可靠的选择。全长cDNA是指不仅包含完整的阅读框架，还拥有5’和3’端非编码区的cDNA。全长cDNA文库的优点非常明显，其绝大多数克隆是全长的，这不仅能大大提高基因测序和生物信息学分析过程，还利于后期蛋白质表达和功能分析。此外，全长cDNA文库是高效、大规模分离阐释基因功能信息的一条有效途径。

发明内容

本发明的目的是提供一种表达载体及其在植物基因功能研究中的应用。

本发明提供了一种特异表达载体：包括如下元件：LB序列、RB序列、抗性筛选基因甲、抗性筛选基因乙、启动子、终止子和特异DNA分子；所述特异DNA分子中具有两个sfiI酶切位点；所述特异表达载体中，所述特异DNA分子以外的其它部分不具有sfiI酶切位点；所述启动子、所述特异DNA分子和所述终止子处于同一表达盒，且自上游至下游依次为：所述启动子、所述特异DNA分子和所述终止子。

所述特异DNA分子如序列表的序列1自5’端第2568-2605位核苷酸所示。

所述特异DNA分子位于所述特异表达载体的多克隆位点中。

所述抗性筛选基因甲为Bar基因。所述Bar基因如序列表的序列1自5’端第759-1310位核苷酸所示。

所述抗性筛选基因乙为卡那霉素抗性基因。所述卡那霉素抗性基因如序列表的序列1自5’端第4571-5365位核苷酸所示。

所述启动子为35S启动子。所述35S启动子如序列表的序列1自5’端第1617-2456位核苷酸所示。

所述终止子为NOS终止子。所述NOS终止子如序列表的序列1自5’端第2640-2892位核苷酸所示。

所述LB序列如序列表的序列1自5’端第1-25位核苷酸所示。