[发明专利]在蛋白纯化过程中灭活病毒的方法

说明书

本发明涉及新的和改良的在蛋白纯化过程期间完成病毒灭活的方法。

本申请是2013年6月13日提交的发明名称为“在蛋白纯化过程中灭活病毒的方法”的第201380034780.5号中国专利申请的分案申请。

相关申请

本申请要求2012年6月29日提交的美国临时专利申请No.61/666,145的优先权，该申请的完整内容整体援引加入本文。

技术领域

本发明提供用于在蛋白纯化过程中灭活病毒的在线(in-line)方法。

背景技术

大规模和经济纯化治疗性蛋白，特别是单克隆抗体对于生物技术工业是日益重要的问题。通常，蛋白通过细胞培养，利用改造为产生所关注的蛋白如单克隆抗体的哺乳动物或细菌细胞系产生。然而，一旦产生，必须分离蛋白与各种杂质，如宿主细胞蛋白(HCP)、内毒素、病毒、DNA等。

在典型的纯化过程中，一旦在细胞培养中表达所关注的蛋白，则将细胞培养进料进行澄清步骤以除去细胞碎片。然后将包含所关注蛋白的澄清细胞培养进料进行一个或多个色谱步骤，其可以包括亲和色谱步骤或阳离子交换色谱步骤。为了确保所关注蛋白的安全性，特别是在治疗性候选物的情况下，必须在纯化过程中灭活可能存在于包含所关注蛋白的样品中的任何病毒。通常，病毒灭活在色谱步骤之后进行(例如，亲和色谱之后或阳离子交换色谱之后)。通常，在大规模方法中，在色谱步骤之后，在大罐或存储罐中收集包含所关注蛋白的洗脱混合物，然后进行病毒灭活步骤/过程，进行延长的时间段同时混合，这可以持续数小时至一天或者更长，以实现可能存在于洗脱混合物中的任何病毒的完全灭活。

本领域中已知一些病毒灭活技术，包括温度、pH、辐射和暴露于某些化学物质。

发明内容

本发明提供在蛋白纯化过程中灭活病毒的方法，所述方法相对于目前工业上在蛋白纯化期间使用的方法具有若干优势。特别地，本文所述的方法在蛋白纯化过程中无需使用大罐或存储罐来进行病毒灭活步骤，减少病毒灭活所需的整体时间以及在蛋白纯化过程中运行病毒灭活操作所需的整体物理空间，这又减少整个纯化过程的整体占用空间(footprint)。

在一些实施方案中，本发明提供一种用于在纯化过程中灭活样品中的一种或多种病毒的方法，其中所述方法包括在所述样品从第一单元操作流向第二单元操作时，连续地将所述样品与一种或多种病毒灭活剂混合。

在一些实施方案中，所述第一单元操作包括结合和洗脱色谱，并且所述第二单元操作包括流过(flow-through)纯化过程。示例性结合和洗脱色谱单元操作包括但不限于A蛋白亲和色谱。

在一些实施方案中，所述流过纯化过程包括两种或更多种选自以下的基质：活性炭、阴离子交换色谱介质、阳离子交换色谱介质和病毒过滤介质。

在一些实施方案中，所述样品包含A蛋白洗脱物，所述洗脱物包含靶分子。示例性的靶分子包括例如抗体。

在一些实施方案中，利用一个或多个在线静态混合器将所述样品与一种或多种病毒灭活剂混合。在其他实施方案中，利用一个或多个缓冲罐将所述样品与一种或多种病毒灭活剂混合。当时使用静态混合器时，样品流在层流范围。

在一些实施方案中，一种或多种病毒灭活剂选自酸、盐、溶剂和去污剂。

在一些实施方案中，本发明提供一种在A蛋白洗脱物中灭活一种或多种病毒的方法，其中所述方法包括利用在线静态混合器将所述洗脱物与一种或多种病毒灭活剂混合，其中在小于10分钟或小于5分钟或小于2分钟或小于1分钟内完成完全的病毒灭活。

在其他实施方案中，本发明提供一种在A蛋白洗脱物中灭活一种或多种病毒的方法，其中所述方法包括利用缓冲罐将所述洗脱物与一种或多种病毒灭活剂混合，其中在小于1小时或小于30分钟内完成完全的病毒灭活。