[发明专利]一种在细胞微囊泡表面修饰配体的方法

权利要求书

1.一种在细胞微囊泡表面修饰配体的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)在细胞微囊泡表面连接二苯基环辛炔；

(b)去除游离的二苯基环辛炔；

(c)在细胞微囊泡表面的二苯基环辛炔上连接叠氮基修饰的配体；

(d)对修饰好的细胞微囊泡进行提纯；

步骤(a)中，利用双功能化分子将二苯基环辛炔共价偶联到细胞微囊泡表面天然存在的氨基末端上；其中，所述的双功能化分子为同时带有二苯基环辛炔和N-羟基琥珀酰亚胺的分子；

步骤(a)中，PBS缓冲液重悬细胞微囊泡，按照每10¹²细胞微囊泡数量加入1nmol～20nmol双功能化分子的比例混合，在室温下反应2～12小时；

步骤(c)中，利用叠氮化的配体与细胞微囊泡表面的二苯基环辛炔进行无铜点击化学反应，从而将配体共价偶联在细胞微囊泡表面；

步骤(c)中，步骤(b)的产物与叠氮化的配体在PBS缓冲液中混匀，在4℃下反应4～24小时，其中，每10¹²囊泡微粒数加入0.1nmol～5nmol叠氮化的配体。

2.根据权利要求1所述的在细胞微囊泡表面修饰配体的方法，其特征在于，所述细胞微囊泡为人、动物、植物或微生物的细胞所分泌或破碎后获得的，具有脂质膜结构的囊泡。

3.根据权利要求1或2所述的在细胞微囊泡表面修饰配体的方法，其特征在于，所述细胞微囊泡为细胞外囊泡、微囊泡、外泌体、调亡小体、脱落囊泡或微粒。

4.根据权利要求1所述的在细胞微囊泡表面修饰配体的方法，其特征在于，所述的双功能化分子为DBCO-sulfo-NHS、或DBCO-NHS、或DBCO-PEG4-NHS。

5.根据权利要求1所述的在细胞微囊泡表面修饰配体的方法，其特征在于，步骤(b)中，通过超滤去除没有偶联在细胞微囊泡上的双功能化分子。

6.根据权利要求1所述的在细胞微囊泡表面修饰配体的方法，其特征在于，步骤(c)中，所述配体为肽、蛋白质、核酸或高分子化合物。

7.根据权利要求1所述的在细胞微囊泡表面修饰配体的方法，其特征在于，所述的叠氮化的配体是将Azide-sulfo-NHS、或Azide-NHS、或Azide-PEG4-NHS与配体按照摩尔比10：1混合，在室温下反应2～12小时，获得叠氮化的配体。

8.根据权利要求1所述的在细胞微囊泡表面修饰配体的方法，其特征在于，步骤(d)中，使用超速离心的方法对修饰好的细胞微囊泡进行提纯。