[发明专利]一种在细胞微囊泡表面修饰配体的方法

说明书

本发明一种在细胞微囊泡表面修饰配体的方法，包括如下步骤：(a)在细胞微囊泡表面连接二苯基环辛炔；(b)去除游离的二苯基环辛炔；(c)在细胞微囊泡表面的二苯基环辛炔上连接叠氮基修饰的配体；(d)对修饰好的细胞微囊泡进行提纯。与现有技术相比，本方法节省时间，过程简便，反应效率高，对配体的类型较少限制，同时能最大限度保持细胞微囊泡的生理活性。有利于增强细胞微囊泡的治疗效果。

技术领域

本发明涉及在细胞微囊泡表面修饰配体的方法，属于生物技术领域。

背景技术

细胞微囊泡是人、动物、植物或微生物的细胞自动分泌释放的或破碎后获得的，具有脂质膜结构的，直径从几十纳米到几微米不等的囊泡。包括细胞外囊泡(Extracellularvesicle)、微囊泡(Microvesicle)、外泌体(Exosome)、调亡小体(Apoptotic body)、脱落囊泡(Shedding vesicle)、微粒(Microparticle)。细胞微囊泡携带有生物活性的蛋白质、脂质、信使RNA(mRNA)、微小RNA(miRNA)、非编码RNA(ncRNA)以及DNA片段。并且能够将这些活性分子传递给受体细胞，调节靶细胞、组织和器官的生物功能。某些类型的细胞，如间充质干细胞，产生的细胞微囊泡含有多种能够保护受损组织，促进生长和修复，以及调节免疫功能的活性生物分子。注射入体内之后可以减少损伤、抑制炎症、促进组织再生和功能恢复。同时，利用电穿孔、化学穿孔、超声等方法还能够将人工合成的小干扰RNA(siRNA)、miRNA、化疗药物装载入细胞微囊泡，使其成为一种药物载体。因此细胞微囊泡是一种新型的生物治疗方法和递送载体。现已在动物模型上验证细胞微囊泡能够促进血管生成、降低炎症反应、促进神经再生、减少心肌和大脑缺血损伤、保护急性肾损伤和肺损伤、治疗糖尿病和神经退行性疾病。然而，静脉注射的细胞微囊泡很快被肝、脾等网状内皮系统(RES)所吞噬和清除，较少到达靶器官。因此，通过表面修饰配体的方法增强其靶向性、体内稳定性和组织穿透性，以及降低血浆清除率具有重要意义。

目前的方法包括工程化供体细胞和膜插入两大类方法，都具有较多步骤，操作复杂、费时。其中，工程化供体细胞的方法需要专门的生物学技术对细胞进行处理，无法修饰任意类型的配体，也不能对体液来源的细胞微囊泡进行修饰。膜插入的方法可能对细胞微囊泡原本的膜结构和理化性质产生较大影响，插入效率较难控制，游离的配体较难去除。因此，相关方面的研究和应用进展受到很大限制。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种在细胞微囊泡表面修饰配体的快速、高效的方法。本发明在细胞微囊泡表面修饰各种配体，有利于对其治疗作用进行进一步研究，有利于加速临床应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种在细胞微囊泡表面修饰配体的方法，包括如下步骤：

(a)在细胞微囊泡表面连接二苯基环辛炔(Dibenzocyclooctyl，DBCO)；

(b)去除游离的二苯基环辛炔；

(c)在细胞微囊泡表面的二苯基环辛炔上连接叠氮基修饰的配体；

(d)对修饰好的细胞微囊泡进行提纯。

其中，所述细胞微囊泡为人、动物、植物或微生物的细胞所分泌或破碎后获得的，具有脂质膜结构的，直径从几十纳米到几微米不等的囊泡。

其中，所述细胞微囊泡为细胞外囊泡(Extracellular vesicle)、微囊泡(Microvesicle)、外泌体(Exosome)、调亡小体(Apoptotic body)、脱落囊泡(Sheddingvesicle)或微粒(Microparticle)。