[发明专利]一种鉴定中药守宫的特异性引物、试剂盒及鉴别方法

权利要求书

1.一种鉴定中药守宫的特异性引物，其特征在于，所述引物如下：

上游引物：5′-CAACGGGGCCCTATATTCCG-3′；

下游引物：5′-AGGGTTGCGTATGGGGTTTC-3′。

2.一种鉴定中药守宫的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的引物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，每支所述试剂盒包括各自独立包装的引物液部分和PCR反应液部分；所述PCR反应液部分含有用于进行PCR扩增的含Mg²⁺扩增缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶以及ddH₂O。

4.一种如权利要求1所述的引物或权利要求2或3所述的试剂盒在鉴定中药守宫中的应用。

5.一种鉴定中药守宫的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取待测中药守宫的总DNA，备用；

(2)以步骤(1)中提取的DNA为模板，采用如下引物进行PCR扩增：

上游引物：5′-CAACGGGGCCCTATATTCCG-3′；

下游引物：5′-AGGGTTGCGTATGGGGTTTC-3′；

(3)测定步骤(2)中所得的PCR扩增产物的大小，若所述PCR扩增产物中含有100～250bp的DNA片段，则所述待测中药守宫为真；反之，则所述待测中药守宫为假。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述PCR反应体系包括：

DNA模板，100ng，2μL；

上游引物，10μM，1μL；

下游引物，10μM，1μL；

PCR SuperMix，10μL；

ddH₂O，8μL；

反应总体积为22μL。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述PCR扩增程序如下：95℃预变性5min，95℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸30s，进行30个循环，然后继续72℃延伸5min，降温至4℃，获得的扩增产物4℃保存。

8.根据权利要求5-7任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述100～250bp的DNA片段为110～150bp的DNA片段。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中所述100～250bp的DNA片段为116bp的DNA片段。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的116bp的DNA片段序列如SEQ IDNO：3所示。