[发明专利]一种鉴定中药守宫的特异性引物、试剂盒及鉴别方法

说明书

本发明提供了一种鉴定中药守宫的特异性引物、试剂盒及鉴别方法，基于守宫的CYTB基因设计了大量的引物，且通过大量引物筛选研究，筛选出了具有种属特异性的引物，使用上述引物对待测中药守宫进行鉴定，能将守宫药材与其他混淆品准确的分开，且其PCR扩增产物仅为100～250bp，分子量小，保证了其在短时间内进行大量的中药守宫鉴定，鉴定结果准确、稳定、可靠、灵敏度高。

技术领域

本发明属于中药材鉴定技术领域，具体涉及一种鉴定中药守宫的特异性引物、试剂盒及鉴别方法。

背景技术

守宫为壁虎科动物无蹼壁虎(Gekko Swinhoana Gunther)的全体，其药性寒、味咸，有小毒，入肺、肾经。具有散结解毒、滋阴凉血、熄风镇痉、透经达络等功效。古代医学典籍中关于守宫的记载有很多，如《本草纲目》中记载，守宫主治中风瘫痪，手足不举，或历节风痛，及风惊痫，小儿疳痢，血积瘰，疗蝎螫；清代赵其光在《本草求原》中提到守宫入血分、治血病，有滋阴降痰之功效；《四川中药志》称其能“驱风、破血积包块，治肿瘤”。

由于守宫的来源比较复杂，市售守宫常出现混杂或伪品，如东方蝾螈、中国瘰螈、变色树蜥、蛤蚧、红螺疣螈、喜山岩蜥、青海沙蜥、石龙子和变色沙蜥等。对其中的一些品种，守宫正品与之形态学特征差别细微，采用传统的鉴别方法很难对守宫药材进行鉴定，鉴于守宫在炮制、加工、储藏和运输等各个环节形态有所改变，使得守宫及其混伪品的性状特征消失，从而加大了鉴别难度。而不法分子在经济利益的驱使下，守宫“以假充真”、“以次充好”、“不合格产品”的市场现象普遍存在，即使具有丰富鉴别经验的人员也很难根据形态特征进行准确地鉴别。为确保中药材的质量及临床疗效，已有研究采用现代分子生物学PCR扩增技术，可在短时间内完成对部分中药材的鉴别，然而现有技术中还未提出一种利用PCR技术来快速鉴别中药守宫种的特异性引物以及方法。

发明内容

本发明要解决的第一个技术问题在于提供一种鉴定中药守宫的特异性引物，采用所述引物鉴定中药守宫，鉴定结果准确、稳定、可靠、灵敏度高，能够在短时间内对大量待测中药守宫进行快速鉴定，效率高。

本发明要解决的第二个技术问题在于提供一种鉴定中药守宫的试剂盒，采用所述试剂盒鉴定中药守宫，鉴定结果准确、稳定、可靠、灵敏度高，能够在短时间内对大量待测中药守宫进行快速鉴定，效率高。

本发明要解决的第三个技术问题在于提供一种鉴定中药守宫的方法，采用所述方法鉴定中药守宫，鉴定结果准确、稳定、可靠、灵敏度高，能够在短时间内对大量待测中药守宫进行快速鉴定，效率高。

为此，本发明提供了一种用于鉴定中药守宫的引物，所述引物如下：

上游引物：5′-CAACGGGGCCCTATATTCCG-3′；

下游引物：5′-AGGGTTGCGTATGGGGTTTC-3′。

本发明提供了一种鉴定中药守宫的试剂盒，含有上述的引物。

所述的试剂盒，每支所述试剂盒包括各自独立包装的引物液部分和PCR反应液部分；所述PCR反应液部分含有用于进行PCR扩增的含Mg²⁺扩增缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶以及ddH₂O。

本发明还提供了一种所述的引物或所述的试剂盒在鉴定中药守宫中的应用。

本发明提供了一种鉴定中药守宫的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测中药守宫的总DNA，备用；

(2)以步骤(1)中提取的DNA为模板，采用如下引物进行PCR扩增：

上游引物：5′-CAACGGGGCCCTATATTCCG-3′；

下游引物：5′-AGGGTTGCGTATGGGGTTTC-3′。