[发明专利]鉴定Pirangoclytustriangularis的特异性引物和方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及物种鉴定技术领域，尤其是涉及一种鉴定Pirangoclytus triangularis的特异性引物和方法及应用。

背景技术

Pirangoclytus triangularis，属鞘翅目(Coleoptera)，天牛科(Cerambycidae)，虎天牛属(Xylotrechus)。Pirangoclytus triangularis是在1841年被Castelnau和Gory首次命名为Clytus triangularis，同时，Pirangoclytus triangularis也曾在1862年被Chevrolat命名为Mecometopus amabilis，也曾在1860年被Thomson并命名为Mecometopus rhinotragoides，还在1862年被Chevrolat命名为Mecometopus maronensis或Mecometopus funereus。

目前，Pirangoclytus triangularis的物种鉴定主要依靠形态学特征，虎天牛属天牛外观较为相似，加之采用形态特征鉴定对鉴定者的专业知识和天牛样本完整性均要求较高，鉴定过程经常受主观因素的干扰，不仅耗时耗力，而且准确度和重复性都不高。

生物分子树也称系统进化树(phylogenetic tree)，它是用类似树状分支的图来表示各种(类)生物之间的亲缘关系，通过对生物序列的研究来推测物种的进化历史。主要是通过DNA序列、蛋白质序列、蛋白质结构等来构建系统发育树，或者通过蛋白质结构比较包括刚体结构叠合和多结构特征比较等方法建立结构进化树，所得结果科学可靠。

其中，线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COI)基因由于具有较高的进化速率，已成为区分物种和研究物种进化关系的一种理想基因。目前，昆虫遗传研究过程中，扩增昆虫线粒体COI基因一般是采用已报道的通用引物，但由于其通用性较强，特异性较弱，在实际研究过程中，扩增昆虫COI基因的同时，也往往能扩增出昆虫体表及体内杂菌的COI基因片段。这将导致某些昆虫，如对虎天牛属昆虫，尤其是Pirangoclytus triangularis的研究的作用不理想。

目前国内外尚未有专门针对Pirangoclytus triangularis线粒体COI基因的特异性引物的相关报道，也未见应用生物分子系统树对Pirangoclytus triangularis进行鉴定的相关报道。

因此，开发一种省时省力，准确性高，重复率高，且经济快速的Pirangoclytus triangularis的鉴定方法尤为重要。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种用于鉴定Pirangoclytus triangularis的特异性引物，以克服现有技术中存在的通用引物特异性不高的技术问题。

本发明的第二个目的在于提供一种用于鉴定Pirangoclytus triangularis的特异性引物在Pirangoclytus triangularis线粒体COI基因序列扩增中的应用。

本发明的第三个目的在于提供一种Pirangoclytus triangularis的鉴定方法，省时省力，准确性高，重复率高，且经济快速。

本发明的第四个目的在于提供一种Pirangoclytus triangularis的鉴定方法在鉴定Pirangoclytus triangularis物种中的应用。

本发明提供的一种鉴定Pirangoclytus triangularis的特异性引物，所述特异性引物的上下游核苷酸序列分别为：

COI－F：5＇－ATCTTGTATTTGGTGCCTGAG－3＇(SEQ ID NO.1)；

COI－R：5＇－AGTCGGAGTACCGTCGTG－3＇(SEQ ID NO.2)。

另外，本发明还提供了上述特异性引物在Pirangoclytus triangularis线粒体COI基因序列扩增中的应用。

另外，本发明还提供了一种Pirangoclytus triangularis的鉴定方法，以Pirangoclytus triangularis样本为基础构建标准流生物分子系统树，以待测样本为基础构建检测流生物分子系统树，分析和比较所述标准流生物分子系统树与所述检测流生物分子系统树，鉴定所述待测样本是否为Pirangoclytus triangularis。