[发明专利]急性肝胰腺坏死综合症专用检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及急性肝胰腺坏死综合症专用检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括：酶标板和酶标检测抗体；其中，所述酶标板上包被有抗急性肝胰腺坏死综合症的特异性卵黄抗体，所述酶标检测抗体为酶标记的抗急性肝胰腺坏死综合症的多克隆抗体。本发明的试剂盒所包被抗体采用抗急性肝胰腺坏死综合症的特异性卵黄抗体作为包被抗体，将所述卵黄抗体用来检测哺乳动物病原具有灵敏度高、价格便宜、具有动物福利保护的特点，试剂盒精度高，检测简单，便于推广应用。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种试剂盒及其制备方法，尤其涉及急性肝胰腺坏死综合症专用检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

自2009年以来，早期死亡综合症(EMS)，又称急性肝胰腺坏死综合症(AHPNS)给亚洲，特别是东南亚和中国的对虾养殖产业造成了前所未有的冲击。除了大规模减产外，该疾病还带来了诸多负面问题，例如：对虾养殖就业问题、社会福利问题、对虾供求问题和全球对虾总体价格问题等等。

2013年5月，美国亚利桑那大学水产病理实验室(μAZ-APL)定义急性肝胰腺坏死综合症(AHPNS)病原为副溶血弧菌的特异菌株，该菌株能够产生毒素并诱导健康对虾致病。2014年，在世界范围内普遍证实目前APHND的病因与副溶血弧菌所携带的毒素质粒所表达的PirA和PirB两种毒素相关。

目前针对该疾病的诊断集中在对毒素质粒的基因检测。现阶段已出现了一种商业化的基因检测试剂盒和三种通过基础研究得出的不同引物设计得到的诊断方法。

CN 103667498A公开了副溶血性弧菌的检测方法。所述方法用于副溶血性弧菌检测的特异性引物是根据副溶血性弧菌种特异性基因tlh的保守区域所设计的一对外围引物、一对交叉引物和一对特异性检测探针；副溶血性弧菌种特异性基因tlh是编码副溶血性弧菌不耐热溶血毒素TLH的毒力基因。检测方法：副溶血性弧菌模板DNA的提取；外围引物的验证；交叉引物恒温扩增反应体系的建立；交叉引物恒温扩增程序；扩增产物的检测。CN104360065A公开了检测副溶血性弧菌的酶联免疫试剂盒。所述的试剂盒含有两株能特异性地结合于副溶血性弧菌的单克隆抗体，一株为专门作为捕捉抗体的单克隆抗体3G9F7D5C9，CGMCC No.9010，另一株是作为检测抗体的单克隆抗体3G9E9G3H7，CGMCC No.8003。

现阶段的诊断方法存在的不足之处：(1)基因诊断需要PCR仪器以及复杂的操作过程，且时间一般在4个小时以上，不利于基层以及现场对疫情的快速诊断。而且目前该诊断方法在国内还没有商品化的产品，全球范围内的三种基因检测方法均由国外提供，其中一种已得到商品化；(2)基因诊断只能检测是否存在毒素表达基因，并不能诊断出毒素是否得以表达。而急性肝胰腺坏死综合症得根本原因是表达的毒素蛋白对机体的损伤，因此只有检测毒素蛋白才能更准确地判断疫病的爆发，减少假阳性；(3)目前的基因诊断技术只有95％的准确性，还有待进一步提高；(4)试剂盒的检测效率不高。

发明内容

本发明的目的在于提供急性肝胰腺坏死综合症专用检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒通过特异性卵黄多克隆抗体提高检测灵敏度，同时降低检测的操作难度。

为达到此发明的目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种检测急性肝胰腺坏死综合症的试剂盒，所述试剂盒包括：酶标板和酶标检测抗体；

其中，所述酶标板上包被有抗急性肝胰腺坏死综合症的特异性卵黄抗体，所述酶标检测抗体为酶标记的抗急性肝胰腺坏死综合症的多克隆抗体。

作为试剂盒，酶标板和酶标检测抗体是其核心成分，只要有这两种成分就能实现基本的抗原-抗体结合反应。至于辅助成分，比如样品稀释液、洗涤液、酶底物溶液、终止液、阳性对照和阴性对照，可以与上述三种成分配套组装在一个试剂盒中，也可以单独提供，因此本发明中试剂盒可以包括这些辅助成分，也可以不包括，本发明优选包括这些辅助成分，以方便使用。