[发明专利]一种检测地中海贫血基因突变的探针、引物及试剂盒

权利要求书

1.一种荧光不对称PCR-熔点分析法检测地贫基因的探针及引物，其特征在于，所述探针由检测地贫基因的双杂交探针和双杂交内参探针组成，所述检测地贫基因的双杂交探针和所述双杂交内参探针均由供体探针和受体探针组成，且供体探针和受体探针成对使用，所述供体探针的3’端标记荧光供体基团，所述受体探针的5’端标记荧光受体基团；

所述检测地贫基因的双杂交探针具体为：

检测缺失型α-地贫的双杂交探针，由寡核苷酸序列SEQ ID No：1、3、5、7、9、11、13所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：2、4、6、8、10、12、14所示的受体探针组成，其中，寡核苷酸序列SEQ ID No：1所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：2所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：3所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：4所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：5所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：6所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：7所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQID No：8所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：9所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：10所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：11所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：12所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：13所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：14所示的受体探针成对使用；

检测非缺失型α-地贫的双杂交探针，由寡核苷酸序列SEQ ID No：15、17、19、21、23、25所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：16、18、20、22、24、26所示的受体探针组成，其中，寡核苷酸序列SEQ ID No：15所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：16所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：17所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：18所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：19所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：20所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：21所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：22所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：23所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：24所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：25所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：26所示的受体探针成对使用；

检测β-地贫的双杂交探针，由寡核苷酸序列SEQ ID No：27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48所示的受体探针组成，其中，寡核苷酸序列SEQ ID No：27所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：28所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：29所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：30所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：31所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：32所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ IDNo：33所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：34所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：35所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：36所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：37所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：38所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：39所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：40所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：41所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：42所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：43所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：44所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：45所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：46所示的受体探针成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：47所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：48所示的受体探针成对使用；

还对所述检测地贫基因的双杂交探针中至少一条寡核苷酸序列进行锁核酸修饰；修饰后的寡核苷酸序列具体为：

SEQ ID No：10为：5’-TGTGGTGAGCTGAGATC+ATGCCA-3’；

SEQ ID No：49为：5’- CCACCTTCCAGCAGATGTGGAT+CAGC -3’；

SEQ ID No：50为：5’- AGGAGTATGACGAGT+CCGGCCCC -3’；

SEQ ID No：16为：5’- GAG+TTCACCCCTGCGGTGCAC -3’；

SEQ ID No：18为：5’- CCCTGGAC+AAGTTCCTGGCTTC -3’；

SEQ ID No：20为：5’- GTTAAGC+TGGAGCCTCGGTAGCCGTT -3’；

SEQ ID No：26为：5’- TCCTGGCCCCG+GACCCAAACC -3’；

SEQ ID No：28为：5’- AGGG+CTGGGCAT+AAAAGTCA -3’；

SEQ ID No：30为：5’- GCAACCTCAAA+CAGACACCATGGT -3’；

SEQ ID No：31为：5’- TCTGACTCCT+GAGGAGAAGT -3’；

SEQ ID No：32为：5’- GTTACTGCCCTGT+GGGGCAAGGTGAA -3’；

SEQ ID No：33为：5’- CGTGGATGA+AGTTGGTGGT -3’；

SEQ ID No：34为：5’- GAGGCC+CTGGGCAGGTTGCTA -3’；

SEQ ID No：35为：5’- CTCTCTCTGCCTAT+TGGT+CTAT -3’；

SEQ ID No：36为：5’- CCCACCCTTAGGCTGCT+GGTGG+TC -3’；

SEQ ID No：37为：5’- CCTTGGA+CCCAGAGGTT+CTTTGAGTC -3’；

SEQ ID No：39为：5’- GTGCCTTTAGTG+ATGG+CCTGGCT -3’；

SEQ ID No：40为：5’- TGG+ACAACC+TCAAGGGCACCTT -3’；

SEQ ID No：51为：5’- CCACCTTCCAGCAGATGTGGAT+CAGC -3’；

SEQ ID No：52为：5’- AGGAGTATGACGAGT+CCGGCC -3’；

其中，“+”符号表示3’端的碱基为锁核酸修饰碱基；

所述双杂交内参探针具体为：

检测α-地贫的双杂交内参探针，由寡核苷酸序列SEQ ID No：49所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：50所示的受体探针组成；

检测β-地贫的双杂交内参探针，由寡核苷酸序列SEQ ID No：51所示的供体探针和寡核苷酸序列SEQ ID No：52所示的受体探针组成；

所述引物由检测地贫基因的引物和内参引物组成；

所述检测地贫基因的引物具体为：

检测缺失型α-地贫的引物，由SEQ ID No：53-64所示的寡核苷酸序列组成，其中，寡核苷酸序列SEQ ID No：53所示的正向引物和寡核苷酸序列SEQ ID No：54所示的反向引物成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：55所示的正向引物和寡核苷酸序列SEQ ID No：56所示的反向引物成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：57所示的正向引物和寡核苷酸序列SEQ IDNo：58所示的反向引物成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：59所示的正向引物和寡核苷酸序列SEQ ID No：60所示的反向引物成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：61所示的正向引物和寡核苷酸序列SEQ ID No：62所示的反向引物成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：63所示的正向引物和寡核苷酸序列SEQ ID No：64所示的反向引物成对使用；

检测非缺失型α-地贫的引物，由SEQ ID No：65-68所示的寡核苷酸序列组成，其中，寡核苷酸序列SEQ ID No：65所示的正向引物和寡核苷酸序列SEQ ID No：66所示的反向引物成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：67所示的正向引物和寡核苷酸序列SEQ ID No：68所示的反向引物成对使用；

检测β-地贫的引物，由SEQ ID No：69-72所示的寡核苷酸序列组成，其中，寡核苷酸序列SEQ ID No：69所示的正向引物和寡核苷酸序列SEQ ID No：70所示的反向引物成对使用，寡核苷酸序列SEQ ID No：71所示的正向引物和寡核苷酸序列SEQ ID No：72所示的反向引物成对使用；

检测正常α-基因的引物，由寡核苷酸序列SEQ ID No：73所示的正向引物和寡核苷酸序列SEQ ID No：74所示的反向引物组成；

所述内参引物具体由SEQ ID No：75-76所示的寡核苷酸序列组成。