[发明专利]一种检测地中海贫血基因突变的探针、引物及试剂盒

说明书

本发明涉及一种荧光不对称PCR‑熔点分析法检测地贫基因的探针，所述探针为双杂交探针，所述双杂交探针包括：检测缺失型α‑地贫的双杂交探针，其对应寡核苷酸序列SEQ ID No：1‑14；检测非缺失型α‑地贫的双杂交探针，其对应寡核苷酸序列SEQ ID No：15‑26；检测β‑地贫的双杂交探针，其对应寡核苷酸序列SEQ ID No：27‑48。本发明还涉及荧光不对称PCR‑熔点分析法检测地贫基因的引物及试剂盒。本发明具有可以同时检测36种地贫突变基因的优点，与同类产品相比，检测位点更全面，检测时间更短，效率更高。

技术领域

本发明涉及基因检测技术，特别涉及一种使用荧光不对称PCR-熔点分析法检测地贫基因的探针、引物及试剂盒。

背景技术

地中海贫血(简称“地贫”)是由于珠蛋白基因发生缺陷，致使珠蛋白链合成减少或不能合成，使形成血红蛋白的珠蛋白链比例失衡，而导致的一种可遗传的溶血性血液病。主要包括两种类型：α-地贫和β-地贫。

α-地贫包括缺失型α-地贫和非缺失型α-地贫，是世界上最常见的单基因遗传病之一。α珠蛋白基因位于16号染色体上，每条16号染色体有2个α珠蛋白基因(简称“α-基因”)。α-地贫是由于α-基因发生突变导致肽链失衡而造成的。若是染色体上的1个α-基因发生了缺失或缺陷，α链的合成只受到了部分抑制，则称为α⁺地贫；若是染色体上2个α-基因都发生了缺失或缺陷称为α⁰地贫。只有1个α-基因发生异常，即α⁺地贫杂合状态时，一般没有明显的临床症状，表现型为静止型；当2个α-基因发生异常，即α⁺地贫纯合子或者α⁰杂合子状态时，仍有相当数量的α-链合成，症状轻微，表现型为标准型；当3个α-基因发生异常，即α⁰和α⁺地贫的杂合子状态时，患者仅能合成少量的α-链，症状为中度溶血性贫血，表现型为血红蛋白H病(Hb H病)；当4个α-基因发生异常，即α⁰地贫纯合子状态，无法生成α-链。正常情况下胎儿的血红蛋白主要成分为Hb F，由于缺乏α-链。多余的γ-链聚合形成四聚体，即Hb Bart’s。Hb Bart’s具有很高的氧亲和性，无法解决胎儿宫内供养的生理机能，继而引发胎儿水肿症，导致胎儿在宫内受累或分娩后半小时内死亡的妊娠结局。

中国常见的缺失型α-地贫基因型主要为-α^3.7、-α^4.2和--^SEA，这三种缺失型在个体中的不同组合，可表现为静止型、标准型、血红蛋白H病和Hb Bart’s胎儿水肿综合症这四种表现型。随着α-地贫机制的进一步阐明，一些新的基因缺失型相继被发现，如--^THAI/、--^FIL/与-α^27.6。

α-地贫除了缺失类型外，还包括非缺失型即α-珠蛋白基因点突变，由于非缺失型α-地贫的基因突变大多数发生在1个基因(α2或α1)上，不会使另一个α-基因功能受损，所以定义为α⁺-地贫，即为α^Tα/或αα^T/。其杂合子既有静止型α-地贫表型(Hb Westmead，即α^WSα/)，也有轻型α-地贫表型(如α^CSα/和α^QSα/)。α^CSα/在泰国人群中的基因频率达4％，是东南亚地区最常见的非缺失型。α^WSα/是最常见的非缺失型α-地中海贫血，在广西地区的发生率约为1.55％，α^CSα/和α^QSα/次之，分别为1.21％和0.36％。近几年，中国人群中还报道了CD30(-GAG)、CD31(AGGAAG)、CD78(-C)和CD118(+TCA)等变异类型。