[发明专利]一种细胞和组织全蛋白提取方法

权利要求书

1.一种细胞和组织全蛋白提取方法，其特征在于分别采用变性裂解液以及非变性裂解液作为提取试剂，采用离心机、多只1.5ml离心试管和多只中部具有一道隔膜的50ml柱形聚乙烯离心试管作用提取工具，在采用变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白时，采用以下几个步骤制得，第一步，把1ml具有0.5至2之间×107个数的细胞放于1.5ml离心试管中， 1.5ml离心试管内加入1ml预先冷却的PBS细胞洗涤溶液，然后把1.5ml离心试管用离心重力加速度1,000xg的离心机离心3分钟，停止离心后，弃除1.5ml离心试管内上层清液，离心、弃除上清流程共重复操作三次，第二步，将重复三次离心、弃除上清后细胞，根据细胞沉淀体积加入同体积的预先冷却的PBS细胞洗涤溶液，进行细胞重悬操作，接着将重悬后细胞用离心机离心弃出上层清液，第三步，根据离心试管内细胞量加入对应量的变性裂解液，剧烈震荡15s，第四步，将震荡后裂解液转移于50ml柱形聚乙烯离心试管内，采用转速14,000 rpm 离心机离心30s 后，收集50ml柱形聚乙烯离心试管管底的裂解液即为全细胞蛋白提取液，第五步，将全细胞蛋白提取液内加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解，即完成采用变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白工序。

2.根据权利要求1所述的一种细胞和组织全蛋白提取方法，其特征在于采用非变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白时，采用以下几个步骤制得，第一步，把1ml具有0.5至2之间×107个数的细胞放于1.5ml离心试管中，1.5ml离心试管内加入1ml预先冷却的PBS细胞洗涤溶液，然后把1.5ml离心试管用离心重力加速度1,000xg的离心机离心3分钟，停止离心后，弃除1.5ml离心试管内上层清液，离心、弃除上清流程共重复操作三次，第二步，将重复三次离心、弃除上清后细胞，根据细胞沉淀体积加入同体积的预先冷却的PBS细胞洗涤溶液，进行细胞重悬操作，接着将重悬后细胞用离心机离心弃出上层清液，第三步，根据离心试管内细胞量加入对应量的非变性裂解液，并剧烈震荡15s，将震荡后裂解液转移于冰上孵育5min，并每隔一分钟震荡一次，第四步，将震荡后裂解液转移于50ml柱形聚乙烯离心试管内，采用转速14,000 rpm 离心机离心30s 后，收集50ml柱形聚乙烯离心试管管底的裂解液即为全细胞蛋白提取液，第五步，将全细胞蛋白提取液内加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解，即完成采用变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白工序。

3.根据权利要求1所述的一种细胞和组织全蛋白提取方法，其特征在于采用变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白，进行根据离心试管内细胞量加入对应量的变性裂解液工序时，细胞量体积和加入的变性裂解液体积比例在1:7至1：12.5之间，比例随细胞量体积增大比例逐渐增大。

4.根据权利要求2所述的一种细胞和组织全蛋白提取方法，其特征在于采用非变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白，进行根据离心试管内细胞量加入对应量的非变性裂解液工序时，细胞量体积和加入的非变性裂解液体积比例在1:7至1：12.5之间，比例随细胞量体积增大比例逐渐增大。