[发明专利]一种细胞和组织全蛋白提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及全蛋白提取工艺，特别是一种能从细胞组织中快速、高效提取全蛋白，且能防止细胞裂解过程中DNA沉淀导致的部分蛋白丢失的一种细胞和组织全蛋白提取方法。

背景技术

目前，公知的方法，从细胞组织中提取全蛋白主要是采用RIPA裂解液作为提取试剂，采用RIPA裂解液作为提取试剂提取全蛋白存在速度慢的缺点，细胞经PBS细胞洗涤溶液洗涤处理后，一般需要20到30分钟才能完成所有后续提取全蛋白流程，由于提取时间过长，会因为细胞裂解过程中DNA沉淀导致部分蛋白丢失。

发明内容

为了克服目前采用RIPA裂解液作为从细胞组织中提取全蛋白试剂，存在速度慢、全蛋白丢失的弊端，本发明提供了采用变性裂解液和非变性裂解液作为提取试剂，采用离心机、1.5ml离心试管和中部具有一道隔膜的50ml柱形聚乙烯离心试管作用提取工具，采用新工艺从细胞组织中提取全蛋白，变性裂解液作为提取试剂，经过PBS细胞洗涤溶液洗涤、离心机离心工序后，整个后续全蛋白提取时间只需要1分钟左右，非变性裂解液作为提取试剂，经过PBS细胞洗涤溶液洗涤、离心机离心工序后，整个全蛋白提取时间只需要6分钟左右，有效提高了提取速度，并能防止细胞裂解过程中时间过长导致DNA沉淀、部分蛋白丢失的一种细胞和组织全蛋白提取方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种细胞和组织全蛋白提取方法，其特征在于分别采用变性裂解液以及非变性裂解液作为提取试剂，采用离心机、多只1.5ml离心试管和多只中部具有一道隔膜的50ml柱形聚乙烯离心试管作用提取工具，在采用变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白时，采用以下几个步骤制得，第一步，把1ml具有0.5至2之间×107个数的细胞放于1.5ml离心试管中， 1.5ml离心试管内加入1ml预先冷却的PBS细胞洗涤溶液，然后把1.5ml离心试管用离心重力加速度1,000xg的离心机离心3分钟，停止离心后，弃除1.5ml离心试管内上层清液，离心、弃除上清流程共重复操作三次，第二步，将重复三次离心、弃除上清后细胞，根据细胞沉淀体积加入同体积的预先冷却的PBS细胞洗涤溶液，进行细胞重悬操作，接着将重悬后细胞用离心机离心弃出上层清液，第三步，根据离心试管内细胞量加入对应量的变性裂解液，剧烈震荡15s，第四步，将震荡后裂解液转移于50ml柱形聚乙烯离心试管内，采用转速14,000 rpm 离心机离心30s 后，收集50ml柱形聚乙烯离心试管管底的裂解液即为全细胞蛋白提取液，第五步，将全细胞蛋白提取液内加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解，即完成采用变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白工序。

所述的采用非变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白时，采用以下几个步骤制得，第一步，把1ml具有0.5至2之间×107个数的细胞放于1.5ml离心试管中，1.5ml离心试管内加入1ml预先冷却的PBS细胞洗涤溶液，然后把1.5ml离心试管用离心重力加速度1,000xg的离心机离心3分钟，停止离心后，弃除1.5ml离心试管内上层清液，离心、弃除上清流程共重复操作三次，第二步，将重复三次离心、弃除上清后细胞，根据细胞沉淀体积加入同体积的预先冷却的PBS细胞洗涤溶液，进行细胞重悬操作，接着将重悬后细胞用离心机离心弃出上层清液，第三步，根据离心试管内细胞量加入对应量的非变性裂解液，并剧烈震荡15s，将震荡后裂解液转移于冰上孵育5min，并每隔一分钟震荡一次，第四步，将震荡后裂解液转移于50ml柱形聚乙烯离心试管内，采用转速14,000 rpm 离心机离心30s 后，收集50ml柱形聚乙烯离心试管管底的裂解液即为全细胞蛋白提取液，第五步，将全细胞蛋白提取液内加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解，即完成采用变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白工序。

所述采用变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白，进行根据离心试管内细胞量加入对应量的变性裂解液工序时，细胞量体积和加入的变性裂解液体积比例在1:7至1：12.5之间，比例随细胞量体积增大比例逐渐增大。

所述采用非变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白，进行根据离心试管内细胞量加入对应量的非变性裂解液工序时，细胞量体积和加入的非变性裂解液体积比例在1:7至1：12.5之间，比例随细胞量体积增大比例逐渐增大。