[发明专利]一种检测特鲁曲班光学异构体含量的方法有效

专利信息
申请号: 201710262276.0 申请日: 2017-04-20
公开(公告)号: CN106950319B 公开(公告)日: 2019-08-30
发明(设计)人: 陈福欣;严贝贝;刘静;加晓丹;陈苏英;龚频 申请(专利权)人: 西安科技大学
主分类号: G01N30/02 分类号: G01N30/02;G01N30/06
代理公司: 西安通大专利代理有限责任公司 61200 代理人: 范巍
地址: 710054 陕*** 国省代码: 陕西;61
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摘要:
搜索关键词: 一种 检测 特鲁曲班 光学 异构体 含量 方法
【说明书】:

技术领域

发明涉及一种基于手性高效液相色谱-质谱/质谱联用技术检测和监测生物样品中(R)-特鲁曲班和(S)-特鲁曲班光学异构体含量的方法,属于药物分析领域。

背景技术

早在20世纪初发现,不同的手性药物对映体,具有不同的性质。通过对手性药物的深入研究,它的研究方法及技术得到了快速发展,人们对手性药物的药理活性也有了更深入的了解,并在短短几十年的时间里,将更多新的手性药物应用于临床。目前,常用的药物中,多数为手性分子,尤其是天然和半合成药物中的手性药物达99%以上,且其存在形式多为单一的对映体。但是,在上市的合成药物中手性药物只占40%,且以单一对映体形式存在的药物仅有六十余种,其余均为不同对映体混合物。手性药物对映体进入人体内后,与生物大分子相互识别、相互作用的过程具有立体选择性,因此导致其生物活性、药动学、药理学活性等方面的差异,有时甚至会引起严重的毒副作用。例如20世纪60年代震惊世界的“沙利度胺事件”导致大约8000个婴儿先天畸形。后来,经过大量的毒理学实验,人们发现,(R)-沙利度胺具有良好的抑制妊娠反应作用,但(S)-沙利度胺可强烈致畸。因此,建立手性药物光学异构体的体内检测方法对药物安全是非常重要的。

特鲁曲班(Terutroban,CAS:165538-40-9),有一个手性中心,两个光学异构体,即(R)-特鲁曲班和(S)-特鲁曲班,是一种口服血小板和血管壁中血栓素-前列腺素受体选择性阻断药,属于非前列腺素类可逆的血栓烷受体拮抗剂,是一种非选择性的具有高度亲和力且无内源性拟交感作用的β-受体阻滞剂。

最近的研究表明,特鲁曲班的微出血的概率明显高于阿司匹林,尚未有重大或危及生命出血或颅内出血等报道。但有报道称,该副反应可能与其另外一个对映异构体(S)-特鲁曲班有关。因此,全面和深入的了解特鲁曲班不同对映异构体在生物体内的活性是非常重要的。同时,根据新药申报及临床药物管理的规定,不同的光学异构体应按照不同的化学实体对待。因此,同时建立(R)和(S)-特鲁曲班体内/外药物浓度的分析方法是非常必要的,也是手性药物进一步体内研究的基础。

反相手性高效液相色谱-质谱/质谱联用技术结合了手性色谱柱对光学异构体的分离能力和质谱/质谱联用技术的高灵敏度,可以较好的解决手性药物的光学异构体的体内/外检测问题。然而,针对不同的分离对象,需要对进样量、柱温、洗脱剂(即流动相)、流速、母离子/子离子选择、碰撞能量、锥孔电压等大量条件和参数进行优化和筛选,既要保证光学异构体的分离,还要达到微量或痕量药物的检测要求,难度极大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于手性高效液相色谱-质谱/质谱联用技术定量检测特鲁曲班光学异构体含量的方法,特别适合临床药物检测/监测的应用。

为达到上述目的,本发明采用了以下技术方案:

1)样品的准备:将生物样品或生物样品的匀浆液与乙腈混合以沉淀蛋白,通过离心分离沉淀,将离心所得上清液吹干,得到待分析样品;或将非生物样品用乙腈溶解、定容后得到待分析样品;

2)确定手性色谱分离条件:根据(R)-特鲁曲班和(S)-特鲁曲班的分离度≥1.5的要求,手性高效液相色谱分离中采用的流动相为甲醇或乙腈与水、易挥发性缓冲盐以及易挥发性酸的混合溶液,混合溶液中所述缓冲盐的浓度为0.1-10mM,所述酸的体积分数为0.01-0.5%,甲醇或乙腈与水的体积比为1.5-4:1;柱温为5-50℃;进样量为1-10μL;流动相流速为0.1-1mL/min,等度洗脱;

3)确定质谱/质谱工作条件:采用三重四级杆质谱以及多反应监测扫描模式(MRM);母离子和子离子分别为408.1和223.1;锥孔电压为30-50V;碰撞能量为35-50eV;

4)光学异构体含量测定:对待分析样品进行手性高效液相色谱-质谱/质谱分析,然后利用外标法计算样品中的(R)-特鲁曲班和(S)-特鲁曲班的含量。

所述生物样品选自血浆、组织液、淋巴液、脑脊液、尿液、汗液等,或生物组织,如肝脏、肾脏、心脏、胰脏、大脑等。

所述步骤1)中,沉淀蛋白所用乙腈的体积为生物样品体积的至少4倍。

所述非生物样品包括特鲁曲班的制剂,如片剂、散剂、胶囊剂等,或者是需要检测的土壤、水、粪便等环境监测物。

所述手性高效液相色谱采用反相涂敷型或键合型手性色谱柱,手性填料包括多糖衍生物类填料。

所述缓冲盐包括甲酸铵、乙酸铵、碳酸铵或碳酸氢铵,所述酸包括甲酸、乙酸或三氟乙酸。

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