[发明专利]一种鸡caspase‑1多克隆抗体的制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于多克隆抗体制备技术领域，尤其涉及一种鸡caspase-1多克隆抗体的制备方法和应用。

背景技术

Caspase家族是一类保守的天冬氨酸特异性蛋白水解酶，能够利用自身催化位点的半胱氨酸残基来特异性地切割目标蛋白的天冬氨酸残基，在细胞凋亡和调控炎症反应等方面起重要作用。caspase-1又称IL-1β转换酶，也是caspase家族中第一个被发现的蛋白酶，首次在哺乳动物细胞中发现，不仅与炎症的发生密切相关，还参与一些细胞的程序性死亡。

与大多数蛋白酶一样，caspase-1也是以无活性的蛋白酶原形式存在于胞质中，其蛋白酶原由较长的N端前结构域，一个大亚基(p20)和一个小亚基(p10)组成。酶原受到活化后，前结构域以及大小亚基之间的结构蛋白会发生水解，产生两个大小亚基p20和p10并形成异源二聚体，再由两个异源二聚体进一步形成四聚体，即有活性的caspase-1，从而切割胞内的蛋白导致细胞凋亡或是启动下游细胞因子(pro-IL-1和pro-IL-18)的活化，最终形成炎性反应。

已有研究表明，RNA病毒如PRRSV、EMCV能够通过炎症小体促使caspase-1活化从而激活下游细胞因子，形成炎症反应。对于其他RNA病毒性疾病或者细菌细菌性疾病是否可以感染鸡细胞从而激活caspase-1诱导IL-1β等炎性细胞因子的表达，需要研究鸡病毒性疾病以及细菌性疾病与鸡caspase-1相互作用机理，探索caspase-1执行生物学功能过程中的作用机制，需要运用到Western-blot、ELISA、IFA、Co-IP等多种实验方法，而这些研究方法都必须有抗鸡caspase-1多克隆抗体作为支撑，然而目前领域中以及生物市场上，尚未制备出鸡caspase-1的抗体，严重制约着鸡caspase-1的相关研究，因此，需要一种针对鸡caspase-1的抗体。

发明内容

本发明提供了一种鸡caspase-1多克隆抗体的制备方法，用于研究鸡病毒性疾病和细菌性疾病的感染机制，并通过揭示该caspase-1蛋白抗病毒及细菌的机制，为开发新型药物提供依据。

为实现上述目的，所采取的技术方案：一种鸡caspase-1多克隆抗体的制备方法，所述制备方法是以caspase-1重组蛋白作为抗原免疫动物而获得所述鸡caspase-1多克隆抗体。

优选地，所述caspase-1重组蛋白含有如SEQ ID NO:1所述的氨基酸序列。

优选地，所述caspase-1重组蛋白是由以下方法制备而成：

将caspase-1基因序列构建到原核表达载体pET-32a中，得到重组原核表达质粒pET32a-caspase-1，然后将所述重组原核表达质粒pET32a-caspase-1转化到BL21宿主菌，得到表达caspase-1蛋白的重组菌株，将所述重组菌株进行诱导表达，得到所述caspase-1重组蛋白。

优选地，所述caspase-1基因序列如SEQ ID NO:2所示。

优选地，所述制备方法具体包括以下步骤：采用第1、14、21、28天颈背部多点注射的方式免疫2只3月龄新西兰大白兔；首免时，重组蛋白与等量的弗氏完全佐剂混合乳化，每只兔子蛋白免疫量约1mg；首免后2周进行3次加强免疫，每隔1周，每次重组蛋白与等量弗氏不完全佐剂混合乳化，每只兔子蛋白免疫量约1-3mg；最后一次加强免疫后2周杀兔子，颈动脉采血，离心后收集血清，得到所述鸡caspase-1多克隆抗体。

本发明提供了采用上述所述方法制备获得的鸡caspase-1多克隆抗体。

本发明提供了上述所述的鸡caspase-1多克隆抗体在制备抗病毒或细菌疫苗或者药物中的用途。

本发明提供了上述所述的鸡caspase-1多克隆抗体在制备检测鸡caspase-1的试剂盒中的用途。

本发明的有益效果是：通过制备鸡caspase-1多克隆抗体，能特异性识别目的蛋白，从而可以深入研究鸡caspase-1基因家族的毒理学意义以及caspase-1基因在病毒介导的天然免疫反应机制中的扮演的角色，为新型疫苗的研究和药物的研制提供新的靶标。同时，本发明构建的原核表达载体pET32a-caspase-1表达caspase-1重组蛋白效率高，分离纯化方法简单，成本低，周期短。

附图说明

图1为鸡caspase-1基因片段的PCR结果电泳图；其中，M：DL2000marker；1:PCR扩增鸡caspase-1结果。