[发明专利]一种重组的长牡蛎CgC1qDC-3蛋白的应用

说明书

本发明属于海洋动物功能基因和免疫活性蛋白领域，具体涉及一种重组的长牡蛎CgC1qDC‑3蛋白及其制备和应用。重组蛋白氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。所述重组CgC1qDC‑3蛋白在制备高亲和力特异识别脂多糖LPS的药物中的应用。本发明重组的CgC1qDC‑3蛋白，可以特异的识别革兰氏阴性菌的病原体相关分子模式脂多糖LPS，对LPS结合亲和力较强(平衡解离常数K_D＝8.74×10^‑7M)。利用本发明获得的重组蛋白可用于病原菌识别或者脂多糖LPS竞争结合制剂的研发。

技术领域

本发明属于海洋动物功能基因和免疫活性蛋白领域，具体涉及一种重组的长牡蛎CgC1qDC-3蛋白的应用。

背景技术

含有与补体C1q分子类似的C1q球状结构域的蛋白，统称为C1qDC蛋白(C1q domaincontaining protein)，C1qDC蛋白在免疫应答过程中发挥重要作用。在脊椎动物中，C1qDC蛋白主要通过参与补体系统经典途径的激活而发挥免疫作用。在无脊椎动物中，C1qDC蛋白的功能趋于多样化。目前发现无脊椎动物C1qDC具有凝集微生物的活性，存在凝集素进化的痕迹；部分C1qDC能与热聚合的人IgG分子相互作用，为补体经典途径的进化提供了有力证据。但是目前的研究显示，C1qDC蛋白在无脊椎动物中主要作为模式识别受体(Patternrecognition receptors，PRRs)，能识别多种的病原体相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)，调理病原菌引发吞噬作用，从而达到清除病原体的目的。

目前发现C1qDC蛋白广泛存在于哺乳动物、低等脊椎动物和无脊椎动物，广谱性或特异性识别PAMPs，介导下游的病原菌和凋亡细胞的清除、促进细胞吞噬、细胞趋化、细胞黏附、炎症及氧化应激等重要的免疫反应过程。但是对C1qDC蛋白的PAMPs结合特异性、结合强度及不同C1qDC蛋白的功能差异的研究相对匮乏。

发明内容

本发明的目的是提供一种重组的长牡蛎CgC1qDC-3蛋白的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种重组的长牡蛎CgC1qDC-3蛋白的应用，重组CgC1qDC-3蛋白在制备高亲和力特异识别脂多糖LPS的药物中的应用。

所述重组的长牡蛎CgC1qDC-3蛋白的获得：

1)以长牡蛎cDNA为模板，采用P1和P2为引物进行PCR扩增，待用；

2)PCR扩增产物与pMD19-T载体连接，而后将连接产物与原核表达载体经EcoRI，BamHI双酶切后经过T4连接酶连接；

3)将上述构建载体转入菌株中进行诱导培养，而后纯化、透析、冻干，即得到重组CgC1qDC-3蛋白；

所述引物P1和P2分别为：

P1：5’-CGCGGATCCATTCCAATAAACACCATCTCC-3’；

P2：5’-CCGGAATTCTTAGGATAGTTTGAAGCCGGAG-3’。

所述步骤2)原核表达载体为pET-30a(+)；菌株为大肠杆菌Transetta(DE3)。

所述步骤3)经诱导培养后采用镍柱纯化获得可溶性重组蛋白，而后透析除盐、冻干。