[发明专利]一种动物富硒保健营养液、制备方法及应用

权利要求书

1.一种动物富硒保健营养液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)富硒酵母菌株选育

将产朊假丝酵母Candida utilis进行氮离子注入多次诱变，获得耐受高浓度亚硒酸钠的酵母突变菌株，命名为Candida utilis cas15；

(2)酵母水解物获得

将上述产朊假丝酵母Candida utilis cas15接种在发酵培养基中，培养得到富硒酵母培养物，收集富硒酵母培养物，离心分离洗涤后，加入混合酶制剂，酶法水解后得到富含有机硒和氨基酸的酵母水解物，干燥后制得淡黄色粉末状产品，产品水分小于8％；

(3)益生菌单株发酵

将动物双歧杆菌Bifidobacterium animalis cas13、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis cas45、纳豆芽孢杆菌Bacillus natto cas78、嗜热链球菌Streptococcus thermophiles cas34、乳酸片球菌Pediococcus acidilacticii cas107这五株益生菌菌株分别单独发酵，获得单株益生菌发酵菌液；

(4)益生菌混合液制备

将动物双歧杆菌B.animalis cas13、枯草芽孢杆菌B.subtilis cas45、纳豆芽孢杆菌B.natto cas78、嗜热链球菌S.thermophiles cas34、乳酸片球菌P.acidilacticii cas107混合，制得益生菌混合液，所制得的益生菌混合液的有效活菌数为1.2×10⁹～×2.1×10⁹cfu/ml；

(5)富硒酵母水解物和益生菌复配

向步骤(4)的益生菌混合液中，按照10～15g/L的比例，加入步骤(2)的富硒酵母水解物干粉；

(6)新鲜培养基质的加入

在步骤(5)的复配混合液中加入新鲜培养基质-甘蔗糖蜜；

(7)按质量浓度0.8～1.0‰向步骤(6)中制得的益生菌混合液中加入山梨酸钾，搅拌均匀，即制得富硒动物保健营养液。

2.根据权利要求1所述的一种动物富硒保健营养液的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)包括以下步骤：

(11)产朊假丝酵母Candida utilis采用YEPD培养平板上培养20～24h，挑取单菌落至含YEPD液体培养基的培养瓶中，160～180rpm，震荡培养24～36h，菌液离心洗涤，制成单细胞悬液，使细胞浓度在10⁸～10⁹个/mL；

(12)将菌悬液均匀涂布到无菌培养皿中，风干制成菌膜；

(13)在N⁺注入机中进行离子注入，能量14～18KeV；

(14)每个菌株做6个梯度剂量，每个剂量两个平板，N⁺注入剂量分别为1.5×10¹⁴、3.0×10¹⁴、4.5×10¹⁴、6.0×10¹⁴、8.0×10¹⁴、1.0×10¹⁵ion/cm²，并做真空对照平板；

(15)诱变完成后，加入无菌水洗涤菌体制成菌悬液；

(16)将菌悬液稀释10⁴～10⁸倍涂布于含亚硒酸钠的筛选培养基，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的酵母突变菌株，而且其发酵生物量在同等条件下比出发菌株提高了1倍以上，命名为Candida utilis cas15。

3.根据权利要求1所述的一种动物富硒保健营养液的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，富硒酵母培养物的制备方法如下：将产朊假丝酵母Candida utilis cas15接种在发酵培养基中，28℃、160～180r/min、振荡培养48～72h，得到富硒酵母培养物。

4.根据权利要求1所述的一种动物富硒保健营养液的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，发酵培养基包括麦芽抽提物10～20g/L，蛋白胨10～15g/L，酵母膏5～10g/L，亚硒酸钠100～180mg/L。