[发明专利]一种富硒酵母、制备方法及应用

权利要求书

1.一种富硒酵母的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)富硒菌株选育

将乙醇假丝酵母Candida ethanolica进行氮离子注入诱变，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的乙醇假丝酵母突变菌株，命名为C.ethanolica cas8；

(2)种子培养液制备

将乙醇假丝酵母突变菌株C.ethanolica cas8接种在斜面培养基得到斜面菌株，再将斜面菌株接种于种子培养基中，得到种子培养液；

(3)发酵培养

将种子培养液按体积百分含量8～12％的接种量接种至含有发酵培养基中，发酵10～12h至对数生长期，在发酵产物中补加终浓度为150～200mg/L的亚硒酸钠，继续发酵培养20～24h，收集发酵产物；

(4)发酵产物收集

将发酵液，离心洗涤，干燥后制得淡黄色粉末状产品，产品水分小于8％。

2.根据权利要求1所述的一种富硒酵母的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)包括以下步骤：

(11)乙醇假丝酵母C.ethanolica采用YEPD培养平板上培养24～36h，挑取单菌落至含YEPD液体培养基的培养瓶中，160～180rpm，震荡培养20～24h，菌液离心洗涤，制成单细胞悬液，使细胞浓度在10⁸～10⁹个/mL；

(12)将菌悬液均匀涂布到无菌培养皿中，风干制成菌膜；

(13)在N⁺注入机中进行离子注入，能量14～18KeV；

(14)每个菌株做6个梯度剂量，每个剂量两个平板，N⁺注入剂量分别为2.0×10¹⁴、4.0×10¹⁴、6.0×10¹⁴、8.0×10¹⁴、1.0×10¹⁵、1.2×10¹⁵ion/cm²，并做真空对照平板；

(15)诱变完成后，加入无菌水洗涤菌体制成菌悬液；

(16)将菌悬液稀释10⁴～10⁸倍涂布于含亚硒酸钠的筛选培养基，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的酵母突变菌株，而且其发酵生物量在同等条件下比出发菌株提高，命名为C.ethanolica cas8。

3.根据权利要求1所述的一种富硒酵母的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，将乙醇假丝酵母C.ethanolica cas8接种在斜面培养基25～30℃培养16～24h，得到斜面菌株，再将所述斜面菌株接种于种子培养基中，25～30℃、160～180r/min、振荡培养16～24h，得到种子培养液。

4.根据权利要求1所述的一种富硒酵母的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，斜面培养基包括以下组分：葡萄糖15～20g/L,蛋白胨15～20g/L,酵母膏5～10g/L,亚硒酸钠20～30mg/L，琼脂12～18g/L。

5.根据权利要求1所述的一种富硒酵母的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，种子培养基包括以下组分：麦芽抽提物10～20g/L，蛋白胨10～15g/L，酵母膏5～10g/L，亚硒酸钠30～60mg/L。

6.根据权利要求1所述的一种富硒酵母的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，发酵培养基包括以下组分：可发酵还原糖200～300g/L，硫酸铜0.025～0.04g/L，硫酸锰0.02～0.03g/L，硫酸亚铁0.25～0.35g/L，硫酸镁4.5～6.0g/L，硫酸锌1.5～2.5g/L，氯化钙2.5～4.5g/L，硫酸铵4～6g/L，氯化钠7.5～10g/L，谷氨酸6～10g/L，L-半胱氨酸为10～12g/L，其余部分用蒸馏水补足至1L。

7.根据权利要求1所述的一种富硒酵母的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，发酵条件为：25～30℃，溶氧为50～70％，pH为5.5～6.0。

8.一种使用如权利要求1～7任一项所述的富硒酵母的制备方法制得的富硒酵母。