[发明专利]一种富硒酵母、制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物富硒酵母，尤其涉及的是一种富硒酵母、制备方法及应用。

背景技术

硒是生物体生命活动所必需的微量元素之一，具有增强机体免疫力、抗氧化和抗衰老等诸多功能。同时，硒也是人和动物体内谷胱甘肽过氧化物酶的辅助因子，具有清除对机体有害的自由基，防止细胞膜氧化受损的作用。相反，缺硒则可能导致癌症、心肌梗塞等多种疾病发生。因此，通过膳食摄取足够的硒，尤其是有机硒，对于预防疾病，维持机体健康有着重要的作用。

生物富硒是获取有机硒的有效途径。目前，生物富硒的方法主要为微生物转化法。用于富硒的微生物有食用菌类、酵母类和细菌等，其中酵母是目前公认的最理想的富硒载体。酵母具有较高的富硒能力，在酵母生长过程中，将无机硒吸收，并将毒性较高的无机硒转化为安全的有机硒，纳入菌体，成为其蛋白质的一部分，主要以含硫氨基酸的类似物(蛋氨酸硒或胱氨酸硒)成为蛋白质的结构组成部分。

啤酒酵母具有生长繁殖快，发酵周期短，对微量元素吸收率高等特点，目前文献报道的富硒酵母生产方法，也大都集中在酿酒酵母上。将普通的酿酒酵母在添加适量的亚硒酸钠的发酵液培养基中，于一定的培养条件下培养，最终获得富硒酵母，进一步开发成富硒产品。而对于其他酵母菌株的富硒能力，目前研究开发得较少，一方面导致各家公司的富硒产品同质化严重，另一方面也极大的限制了其他酵母菌株在富硒产品生产中的应用。因此，开发利用酿酒酵母之外的富硒酵母菌株，生产营养成分多元化、更具特色的富硒产品，对于提升产品竞争力，加快富硒特色产业发展，具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种富硒酵母、制备方法及应用，制得富硒酵母中的硒含量高达3000ppm以上。

本发明是通过以下技术方案实现的：本发明的一种富硒酵母的制备方法，包括以下步骤：

(1)富硒菌株选育

将乙醇假丝酵母Candida ethanolica进行氮离子注入诱变，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的乙醇假丝酵母突变菌株，命名为C.ethanolica cas8；

(2)种子培养液制备

将乙醇假丝酵母突变菌株C.ethanolica cas8接种在斜面培养基得到斜面菌株，再将斜面菌株接种于种子培养基中，得到种子培养液；

(3)发酵培养

将种子培养液按体积百分含量8～12％的接种量接种至含有发酵培养基中，发酵10～12h至对数生长期，在发酵产物中补加终浓度为150～200mg/L的亚硒酸钠，继续发酵培养20～24h，收集发酵产物；

(4)发酵产物收集

将发酵液，离心洗涤，干燥后制得淡黄色粉末状产品，产品水分小于8％。

所述步骤(1)包括以下步骤：

(11)乙醇假丝酵母C.ethanolica采用YEPD培养平板上培养24～36h，挑取单菌落至含YEPD液体培养基的培养瓶中，160～180rpm，震荡培养20～24h，菌液离心洗涤，制成单细胞悬液，使细胞浓度在10⁸～10⁹个/mL；

(12)将菌悬液均匀涂布到无菌培养皿中，风干制成菌膜；

(13)在N⁺注入机中进行离子注入，能量14～18KeV；

(14)每个菌株做6个梯度剂量，每个剂量两个平板，N⁺注入剂量分别为2.0×10¹⁴、4.0×10¹⁴、6.0×10¹⁴、8.0×10¹⁴、1.0×10¹⁵、1.2×10¹⁵ion/cm²，并做真空对照平板；

(15)诱变完成后，加入无菌水洗涤菌体制成菌悬液；

(16)将菌悬液稀释10⁴～10⁸倍涂布于含亚硒酸钠的筛选培养基，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的酵母突变菌株，而且其发酵生物量在同等条件下比出发菌株提高，命名为C.ethanolica cas8。

所述步骤(2)中，将乙醇假丝酵母C.ethanolica cas8接种在斜面培养基25～30℃培养16～24h，得到斜面菌株，再将所述斜面菌株接种于种子培养基中，25～30℃、160～180r/min、振荡培养16～24h，得到种子培养液。