[发明专利]用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的引物对组、探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的引物对组，所述克罗诺杆菌属各个“种”包括阪崎克罗诺杆菌、丙二酸盐阳性克罗诺杆菌、穆汀斯克罗诺杆菌、都柏林克罗诺杆菌以及苏黎世克罗诺杆菌中的任意一种，其特征在于，所述用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的引物对组包括第一引物对、第二引物对以及第三引物对；

所述第一引物对的序列分别如SEQ ID No.s1和2所示；

所述第二引物对的序列分别如SEQ ID No.s3和4所示；

所述第三引物对的序列分别如SEQ ID No.s5和6所示。

2.一种用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的探针，所述克罗诺杆菌属各个“种”包括阪崎克罗诺杆菌、丙二酸盐阳性克罗诺杆菌、穆汀斯克罗诺杆菌、都柏林克罗诺杆菌以及苏黎世克罗诺杆菌中的任意一种，其特征在于，所述用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的探针包括第一探针、第二探针以及第三探针；

所述第一探针的序列如SEQ ID No.s7所示；

所述第二探针的序列如SEQ ID No.s8所示；

所述第三探针的序列如SEQ ID No.s9所示。

3.一种用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的试剂盒，所述克罗诺杆菌属各个“种”包括阪崎克罗诺杆菌、丙二酸盐阳性克罗诺杆菌、穆汀斯克罗诺杆菌、都柏林克罗诺杆菌以及苏黎世克罗诺杆菌中的任意一种，其特征在于，所述用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的试剂盒包括用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的引物对组以及用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的探针；

所述用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的引物对组包括第一引物对、第二引物对以及第三引物对；

所述第一引物对的序列分别如SEQ ID No.s1和2所示；

所述第二引物对的序列分别如SEQ ID No.s3和4所示；

所述第三引物对的序列分别如SEQ ID No.s5和6所示；

所述用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的探针包括第一探针、第二探针以及第三探针；

所述第一探针的序列如SEQ ID No.s7所示；

所述第二探针的序列如SEQ ID No.s8所示；

所述第三探针的序列如SEQ ID No.s9所示。

4.根据权利要求3所述的用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的试剂盒，其特征在于，所述第一引物对、所述第二引物对、所述第三引物对在工作液中的浓度分别为10±1μmol/L，所述第一探针、所述第二探针、所述第三探针的工作液探针浓度分别为10±1μmol/L。

5.根据权利要求3所述的用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的试剂盒，其特征在于，还包括10×Premix Ex Taq缓冲液以及ROX II矫正染料。

6.根据权利要求3所述的用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的试剂盒，其特征在于，还包括分别由所述第一引物对、所述第二引物对以及所述第三引物对扩增片段并放入载体质粒得到的第一标准品、第二标准品、第三标准品。

7.一种用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的方法，所述克罗诺杆菌属各个“种”包括阪崎克罗诺杆菌、丙二酸盐阳性克罗诺杆菌、穆汀斯克罗诺杆菌、都柏林克罗诺杆菌以及苏黎世克罗诺杆菌中的任意一种，所述用于鉴定克罗诺杆菌属各个“种”的方法用于非诊断目的，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测样品的基因组DNA；

(2)以步骤(1)的基因组DNA为反应体系的模板，以序列如SEQ ID No.s1和2所示的第一引物对、以序列如SEQ ID No.s3和4所示的第二引物对、以序列如SEQ ID No.s5和6所示的第三引物对为反应体系的引物，以序列如SEQ ID No.s7所示的第一探针、以序列如SEQIDNo.s8所示的第二探针、以序列如SEQ ID No.s9所示的第三探针为反应体系的探针进行扩增反应；

(3)结合待测样品扩增曲线判定鉴定结果。