[发明专利]一种同时测定穿心莲内酯多种有关物质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，更具体地说，本发明涉及一种同时测定穿心莲内酯中多种有关物质的方法。

背景技术

穿心莲内酯(Andrographolide)系自爵床科穿心莲属植物穿心莲中提取得到的二萜内酯类化合物，具有清热解毒、凉血消肿等功能。现已上市的或处于开发阶段的制剂主要有穿心莲内酯片剂、胶囊、注射剂等。穿心莲內酯是以穿心莲叶为原料，采用不同的提取工艺制备得到的制剂原料药。由于其酯类结构，在水溶液中，特别是高温、强碱性环境中，易水解、开环、异构化和树脂化。穿心莲内酯原料药及其制剂中除主要成分穿心莲内酯外，一般同时存在新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯等二萜内酯类杂质。这些化合物有些是在提取过程中引入的，也有通过降解或内部转化而成。这些杂质可能会影响穿心莲内酯的药效，严重可能导致不良反应，这对于药品的安全性、有效性、质量可控性都是极为不利的。因此，准确测定穿心莲内酯原料及其制剂中有关物质的含量，是评价穿心莲内酯原料药及其制剂质量的重要指标。

目前，对于穿心莲内酯有关物质检测方法的研究较少。文献“穿心莲药材及其制剂中6个内酯类成分的含量分析(药物分析杂志，邓贵华，林朝展，祝晨蔯，2011(2):231-235.)”提供了一种检测穿心莲多种成分的方法，但该法洗脱梯度程序较多，且检测指标仅限于內酯类杂质的检测，且检测时间较长；专利“一种穿心莲内酯有关物质的测定方法”(CN102809625B)，采用了水-乙腈-甲醇三元体系，体系较为复杂，操作繁琐，且其检测的也只是新穿心莲內酯、去氧穿心莲內酯和脱水穿心莲內酯等內酯类分子结构，但是对于其他含量较低但可能影响产品质量安全的其他杂质，没有证据表明也可以同时检测。文献“一测多评法测定穿心莲中5个内酯类成分的含量(《中药材》，王欢，林朝展，吴润菁，祝晨蔯，第37卷第3期2014年3月，448-451)”提供了一测多评法同时测定穿心莲药材中5个內酯类成分的含量的方法，但是经发明人检验，该法在检测穿心莲內酯碱破坏样品时，不能将各有关物质进行有效分离进而进行含量检测。正如上文所述，穿心莲內酯中除了含有各內酯类的杂质外，还有其他如开环、异构化、树脂化的杂质，因此，目前技术仍缺少一种简便、灵敏、高效的穿心莲内酯有关物质的测定方法，能够快速准确且全面地测定及评价穿心莲内酯原料、以及相关制剂制备及稳定性试验期间的有关物质含量。

发明内容

本发明的目的是提供一种更为简便、灵敏高效的测定穿心莲内酯多种有关物质的方法，以能够快速、准确地、全面的同时测定穿心莲内酯原料药及其制剂中有关物质含量。

为实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

一种采用高效液相色谱法同时测定穿心莲內酯多种有关物质的方法，该法采用的色谱条件为：固定相是以十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱；流动相A是水，流动相B是乙腈；进行梯度洗脱，梯度条件为：梯度1流动相的体积比为：A：B＝75～80％：25～20％，进样15～20min后流动相变化为梯度2，梯度2流动相的体积比为：A：B＝65～70％：35～30％，总运行时间为45～55min；检测波长220～230nm，柱温为30～35℃；洗脱流速为0.5～2.0mL/min。

在一些实施方案中，梯度1流动相优选的体积比为：A：B＝77：23。

在一些实施方案中，梯度2流动相优选的体积比为：A：B＝70：30。

在一些实施方案中，检测波长优选224nm。

在一些实施方案中，洗脱流速优选1.0mL/min。

在一些实施方案中，进样样品检测过程中，样品进样量为10～15μL。

在一些实施方案中，所述总运行时间45～55min后，再在梯度1条件下运行10～15min。

在一些实施方案中，所述色谱柱填料粒径为2～5μm；颗粒平均直径为4.6mm。

在一些实施方案中，所述色谱柱的填料粒径为3μm。

在一些实施方案中，在穿心莲内酯对照品及待测样品的配制过程中，选用良溶剂对穿心莲内酯进行溶解，所述良溶剂是对穿心莲内酯原料，制剂及对照品溶解性较好的且与体系相容的溶剂，是甲醇或乙腈，或二者混合物，优选为甲醇。

本发明提到的测定方法，其洗脱流速设定为一般技术人员公知的常识，常见的范围一般为0.5mL/min至2mL/min，本发明优选0.9～1.1mL/min，更优选1.0mL/min。

本发明的方法与现有技术相比具有以下优点和积极效果：