[发明专利]澳洲坚果的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及澳洲坚果的组培领域。更具体地说，本发明涉及一种澳洲坚果的组织培养方法。

背景技术

澳洲坚果，又名昆士兰栗、夏威夷果。其种仁富含不饱和脂肪酸、蛋白质、维生素等，营养价值高，风味十分独特，素有“干果之王”之称。澳洲坚果市场前景看好，生态效益、经济效益具佳，是一种含油量高、营养丰富、风味独特的食用坚果，在国际市场上一直处于供不应求状态。

组织培养繁殖已应用于许多林木、木本果树和观赏性作物的快速繁殖。同时，由于采用组织培养进行繁殖可产生无污染的植物，可有效降低植物疫病传播风险，因此，组织培养也提高了种质交换的安全性。在山龙眼科其他植物，如多花银叶树、红花银桦、高氏白澳山龙眼、极美泰洛泊等已有相关的研究报道。目前,建立适合于澳洲坚果的组织培养方法较少,主要是由于澳洲坚果的外植体在生根培养中生根胶南,因此，开展澳洲坚果组织培养技术的研究，建立一套适合于澳洲坚果的组织培养体系，对加快澳洲坚果的良种繁育进程具有重要意义。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种澳洲坚果的组织培养方法，其从结果枝当年抽生枝条带芽的叶作外植体进行组织培养，在培养基中添加不同浓度的激素和营养物质，配合适当的LED光源照射，提高澳洲坚果外植体的萌芽率、增殖率、芽苗伸长长度以及生根率。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种澳洲坚果的组织培养方法，包括以下步骤：

步骤一、剪取澳洲坚果成年结果树的结果枝当年抽生枝条，切下梢基部的发育未完全的叶，取叶腋里带芽的叶作外植体，用1g/L升汞浸泡3min后用无菌水冲洗，重复5次；

步骤二、接入第一固体培养基进行初代培养10天，培养温度为25℃、光照12h/天，其中，自然光照6h、光照强度2000lux，人工光照6h、光通量密度为80μmol/m²·s，第一固体培养基为1/2MS、7g/L的琼脂、15g/L的蔗糖、2g/L的碳粉、15g/L的糖蜜发酵液、15mg/L的蛋白胨，pH为5.8；

步骤三、接入第二固体培养基进行继代培养60天，培养温度为25℃、光照12h/天，其中，自然光照5h、光照强度2000lux，人工光照7h、光通量密度为80μmol/m²·s，第二固体培养基为1/2MS、2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、10mg/L的赤霉素、15g/L的琼脂、15g/L的蔗糖、15g/L的糖蜜发酵液、2g/L的肌醇、1mg/L的烟酸、5mg/L的多效唑，pH为5.8；

步骤四、接入第三固体培养基进行生根培养30天，培养温度为25℃、光照12h/天，其中，自然光照4h、光照强度2000lux，人工光照8h、光通量密度为80μmol/m²·s，第三固体培养基为1/2MS、2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的赤霉素、2mg/L的吲哚丁酸、15g/L的琼脂、15g/L的蔗糖、15g/L的糖蜜发酵液、1mg/L的盐酸硫胺素、2g/L的肌醇、1mg/L的钼酸钠、5mg/L的硼酸，pH为5.8；

步骤五、接入第四固体培养基再次进行生根培养30天，培养温度为25℃、光照12h/天，其中，自然光照3h、光照强度2000lux，人工光照9h、光通量密度为80μmol/m²·s，第四固体培养基为1/2QL、2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的赤霉素、2mg/L的吲哚丁酸、5mg/L的萘乙酸、15g/L的蔗糖、15g/L的糖蜜发酵液、2mg/L的盐酸吡哆醇、80mg/L的乙二胺四乙酸二钠，pH为5.8；

其中，步骤二～五均在组培箱中进行，组培箱中设置等数量的黄光灯管与紫光灯管，黄光灯管的波长为580nm，紫光灯管的波长为410nm，步骤二的人工光照时，黄光灯管与紫光灯管的启动数量比为1:1，期间喷布雾化的液体培养基，喷布10min、暂停5min，重复4次，步骤三的人工光照时，黄光灯管与紫光灯管的启动数量比为5:7，期间喷布雾化的液体培养基，喷布15min、暂停5min，重复6次，步骤四的人工光照时，黄光灯管与紫光灯管的启动数量比为1:2，期间喷布雾化的液体培养基，喷布20min、暂停10min，重复6次，步骤五的人工光照时，黄光灯管与紫光灯管的启动数量比为1:3，期间喷布雾化的液体培养基，喷布30min、暂停10min，重复6次，所述液体培养基为1/2MS、20g/L的蔗糖。