[发明专利]一种肝素钠的精制方法

权利要求书

1.一种肝素钠的精制方法，其特征在于，其包括：

粗品溶解：将粗品肝素钠溶解于NaCl溶液得到粗溶液；

两次酶解：将所述粗溶液进行先后两次酶解得到酶解液；

乙醇沉淀：向所述酶解液中加入乙醇，经搅拌静置后过滤取沉淀；

离子交换柱纯化：将所述沉淀完全溶解后上离子交换柱纯化得到洗脱液；

吸附层析柱脱色：将所述洗脱液上吸附层析柱脱色得到肝素钠溶液。

2.根据权利要求1所述的肝素钠的精制方法，其特征在于，吸附层析柱脱色包括：将所述洗脱液上柱，上柱速度为1.0BV/h，上柱完成后平衡1h，先后进行洗涤脱色以及洗脱肝素钠。

3.根据权利要求2所述的肝素钠的精制方法，其特征在于，洗涤脱色包括：用2BV温度为40-50℃的蒸馏水洗涤，流速为2BV/h。

4.根据权利要求2所述的肝素钠的精制方法，其特征在于，洗脱肝素钠包括：用2BV温度为40-50℃、浓度为0.5 mol/L的NaCl溶液洗脱，流速为0.5BV/h。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的肝素钠的精制方法，其特征在于，粗品溶解过程中，将NaCl溶液加热至30-45℃，所述NaCl溶液的浓度为2%（m/v），所述粗品肝素钠与所述NaCl溶液之比为1：5-10（kg：L），并在30-45℃下保持4-6h。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的肝素钠的精制方法，其特征在于，两次酶解包括第一酶解和第二酶解；第一酶解包括：调节所述粗溶液至pH为7.5-8.5并加热至45-50℃，然后加入蛋白酶Ⅰ至其在NaCl溶液中的质量百分数为0.5%，保持溶液pH为7.5-8.5、温度45-50℃条件下搅拌4-6h得到第一酶解液。

7.根据权利要求6所述的肝素钠的精制方法，其特征在于，所述第二酶解包括：调节所述第一酶解液至pH为8.5-9.5并加热至55-60℃，然后加入蛋白酶Ⅱ至其在NaCl溶液中的质量百分数为0.5%，溶液pH为8.5-9.5、温度55-60℃条件下保持4-6h，调节pH至6.5-7.0并加热至85-90℃，保温0.5h后得到酶解液。

8.根据权利要求1-4中任一项所述的肝素钠的精制方法，其特征在于，乙醇沉淀过程包括向所述酶解液中加入1.5倍酶解液体积的95%乙醇，搅拌均匀后静置沉淀4h-6h；过滤取沉淀。

9.根据权利要求1-4中任一项所述的肝素钠的精制方法，其特征在于，离子交换柱纯化包括：将所述沉淀完全溶解后，调节pH至7.5-8.0，升温至45-50℃后上柱，交换速度为1.0BV/h，上柱完成后平衡1h，然后先后进行洗脱杂质以及洗脱肝素钠。

10.根据权利要求9所述的肝素钠的精制方法，其特征在于，洗脱杂质包括：用2BV温度为40-50℃的蒸馏水洗涤，流速为2BV/h；分别用2BV的1.0 mol/L的NaCl溶液洗涤两次，流速均为1.5BV/h，第一次调节NaCl溶液pH至5.0-5.5，第二次调节NaCl溶液pH至9.5-10.0；再用2BV的1.5 mol/L的NaCl溶液洗涤，流速为0.5BV/h；洗脱肝素钠包括：用2BV温度为40-50℃、浓度为2.5-3.5 mol/L的NaCl溶液洗脱，流速为0.5BV/h。